基于胶体金和核酸适配体的检测技术及其初步应用

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1、学校代号10532学号S152201597分类号密级硕士学位论文基于胶体金和核酸适配体的检测技术及其初步应用学位申请人姓名蓝琳培养单位生物学院导师姓名及职称孟祥贤教授学科专业生物学研究方向化学生物分析论文提交日期2018年05月学校代号：10532学号：S152201597密级：湖南大学硕士学位论文基于胶体金和核酸适配体的检测技术及其初步应用学位申请人姓名：蓝琳导师姓名及职称：孟祥贤教授培养单位：生物学院专业名称：生物学论文提交日期：2018年05月24日论文答辩日期：2018年05月31日答辩委员会主席：蒋波教授Detec

2、tionTechniquesBasedonColloidalGoldandAptamersandTheirPreliminaryApplicationByLANLinB.S.(BeijingCityUniversity)2015AthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequrimentsforthedegreeofMasterofScienceinBiomedicalEngineeringintheGraduateSchoolofHunanUniversitySuperieorP

3、rofessorMENGXiangxianMay,2018湖南大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅

4、和借阅。本人授权湖南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密□，在______年解密后适用本授权书。2、不保密□。（请在以上相应方框内打“√”）作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日I基于胶体金和核酸适配体的检测技术及其初步应用摘要胶体金微粒是直径为1~100nm的纳米级材料，属于超细胶体金。胶体金微粒既有金属的化学性质，又具有独特的物理性质，同时还具有表面效应等方面的特点。胶体金颗粒的形貌、大小及聚集状态和其独特的光学效

5、应有很大关联。核酸探针由于具有一系列优点，比如：在合成上非常简单，设计上也比较容易，并且在检测时具有较好的灵敏度和特异性等，因此在核酸检测中被用作一种重要的检测工具。正是由于上述优势，不断的有科研工作者对此进行深入研究，设计了很多具有不同功能的新型检测核酸探针，在很多方面都具有很重要的作用，比如：分子医学、疾病攻克等方面都有重大贡献。核酸适配体（Aptamer）是一段核酸序列，通常是利用体外筛选技术（SELEX）从核酸分子文库中得到的一段寡核苷酸片段。核酸适配体在不同领域都有广泛的用途，比如：生物制药、生物传感、纳米技术等。

6、本论文以此构建了基于核酸适配体、核酸探针以及交联金技术的新型检测方法，可以高灵敏度的检测小分子、离子及蛋白质。针对这些，主要从两个方面开展了工作：1、基于交联金和核酸适配体技术，构建了一种通用胶体金检测多种靶物质的体系。在该体系中，我们发展了高灵敏度检测ATP小分子、钾离子和凝血酶的方法，基于交联胶体金颗粒的原理，通过这种胶体金技术我们可以只用一种紫外分光光度计便可简单地高灵敏地检测到靶物质，甚至直接用肉眼观察颜色判断靶物质的存在与否。与其他比色检测方法相比，该方法的优势在于只用到了一种功能化胶体金颗粒，检测到凝血酶最低下限

7、为5fM，钾离子的最低下限为50nM，ATP分子的最低下限为0.2nM。该方法方便简单，不需酶的存在，无需复杂的仪器设备，费用低，具有较好潜在应用价值。2、基于聚合酶置换靶物质的原理，构建了一种超灵敏通用胶体金检测蛋白质的体系。在该体系中，通过设计核酸适配体，在利用交联金和核酸适配体的基础上，进一步加入了聚合酶聚合置换靶物质循环扩增反应。当没有靶物质存在时，胶体金、核酸适配体与核酸探针互补杂交，使得胶体金不发生团聚现象，胶体金的峰值不会发生偏移。当靶物质存在时，在聚合酶的作用下，核酸适配体可以与靶物质特异性结合进行循环扩增反

8、应，使靶物质能达到0.5aM的检测下限。关键词：胶体金颗粒；循环扩增反应；核酸适配体；凝血酶；ATPII硕士学位论文AbstractColloidalgoldparticlesarenanoscalematerialswithadiameterof1-100nmandbelongtoult