野黄芩苷抑制巨噬细胞中NLRP3炎症小体活化及其抗败血症作用研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：野黄芩苷抑制巨噬细胞中NLRP3炎症小体活化及其抗败血症作用研究Themechanismforscutellarin-mediatedsuppressionofNLRP3inflammasomeactivationinmacrophagesanditsprotectiveactionagainstbacterialsepsis作者姓名：景艳芸指导教师姓名及学位、职称：何贤辉博士研究员学科、专业名称：免疫学学位类型：学术学位论文提交日期：2018年06月04日论文答辩日期：2018年06月08日答辩委员会主席：廉哲雄论文评阅人：周

2、联周文良学位授予单位和日期：暨南大学2018年6月28日暨南大学硕士学位论文野黄芩苷抑制巨噬细胞中NLRP3炎症小体活化及其抗败血症作用研究硕士研究生景艳芸专业免疫学导师何贤辉研究员暨南大学生命科学技术学院免疫生物学系摘要目的：野黄芩苷（Scutellarin）又名灯盏花乙素，为云南特有的菊科植物灯盏细辛中分离提取的一种黄酮类物质，具有广泛的药理学作用，包括改善脑循环，增加脑血流量，降低脑血管阻力，提高血脑屏障能透性，增加营养性心肌血流量，提高巨噬细胞吞噬功能等作用，以及对抗由二磷酸腺苷引起的血小板凝聚作用。临床主要用于脑血管病后瘫痪以及缺血和缺氧性心脑血管疾病的治

3、疗。另外，近年来一些研究显示，野黄芩苷能抑制炎症相关信号通路和炎症性细胞因子的表达，从而发挥抗炎效应。但是野黄芩苷对NLRP3炎症小体活化的影响，目前并不清楚。因此，在本研究中，我们以LPS致敏的小鼠巨噬细胞建立体外炎症细胞模型，以及利用活大肠杆菌（E.coli）感染小鼠腹腔建立小鼠败血症模型，分别从体外和体内两方面探讨野黄芩苷对NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的影响，及其抗败血症作用。方法：利用碘化丙锭染色法检测野黄芩苷对LPS+ATP或LPS+nigericin诱导的小鼠巨噬细胞焦亡的影响；蛋白质免疫印迹法检测细胞培养上清液和细胞裂解液中IL-1β、caspas

4、e-1、HMGB1等炎症小体活化相关标志蛋白的表达水平，用基于微珠的免疫测定法——流式微球捕获蛋白定量技术（CBA）检测细胞培养上清中可溶性IL-1β的分泌水平；用免疫荧光法和交联法分别检测ATP或nigericin诱导I暨南大学硕士学位论文的小鼠巨噬细胞中ASC斑点的形成和ASC聚集的情况；免疫沉淀法检测细胞裂解液中NLPR3的Ser291磷酸化水平，用活E.coli感染小鼠腹腔建立小鼠败血症模型，野黄芩苷灌胃给药处理后观察小鼠的存活率以及血清和肝脏中炎症因子和炎症细胞的变化情况。结果：野黄芩苷能抑制巨噬细胞中ATP或nigericin诱导的caspase-1的活

5、化和IL-1β的分泌。野黄芩苷也能抑制NLRP3炎症小体活化后诱导的细胞焦亡和ASC斑点的形成。用蛋白激酶A（PKA）抑制剂H89或腺苷酸环化酶（AC）抑制剂MDL12330A阻断PKA信号通路可逆转野黄芩苷对ASC斑点形成以及NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的抑制作用。小鼠败血症模型研究显示，野黄芩苷灌胃给药可以提高败血症小鼠存活率。与此结果一致的是，野黄芩苷灌胃给药处理还可以明显降低E.coli感染小鼠血清中IL-1β的分泌以及肝脏中炎症性细胞的浸润。结论：野黄芩苷通过cAMP-PKA信号通路调节小鼠巨噬细胞中PKA活性，进而抑制NLRP3炎症小体的活化与细胞焦

6、亡，从而抑制过度的炎症反应，发挥抗细菌性败血症的作用。关键词：野黄芩苷；巨噬细胞；NLRP3炎症小体；细胞焦亡；蛋白激酶A*本课题得到国家自然科学基金项目(81773965和81673664)资助。II暨南大学硕士学位论文Themechanismforscutellarin-mediatedsuppressionofNLRP3inflammasomeactivationinmacrophagesanditsprotectiveactionagainstbacterialsepsis*Mastercandidate:Yan-YunJingSpeciality:Immu

7、nologySupervisor:Dr.Xian-HuiHeDepartmentofImmunobiology,JinanUniversityAbstractAim:ScutellarinisaflavonoidisolatedfromErigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.andhasawiderangeofpharmacologicaleffectsincludingimprovingcerebralcirculationandincreasingcerebralbloodFlow,reducingcerebralvascu