YAP负调控p21的表达影响软骨表型衰老的机制研究

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1、暨南大学硕士学位论文题名（中英对照）：YAP负调控p21的表达影响软骨表型衰老的机制研究ThemechanismofYAPnegativelyregulatestheexpressionofp21affectingthechondrocytephenotypesenescence作者姓名：桂涛指导教师姓名查振刚及学位、职称：博士、教授、博士生导师学科、专业名称：外科学、骨科学位类型：科学学位论文提交日期：2018年06月26日论文答辩日期：2018年05月25日答辩委员会主席：白波教授、主任医师、博士生导师论文评阅人：学位授

2、予单位和日期：暨南大学2018年06月暨南大学硕士学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：桂涛签字日期：2018年06月20日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机

3、构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：桂涛导师签名：查振刚签字日期：2018年06月20日签字日期：2018年06月22日学位论文作者毕业后去向：工作单位：暨南大学电话：15521146989通讯地址：广州市天河区黄埔大道西601号邮编：510630II暨南大学硕士学位论文YAP负调控p21的表达影响软骨表型衰老的机制研究摘要研究目的：探

4、讨YAP在软骨、软骨肉瘤组织中的亚细胞定位及表达量，阐明YAP在维持软骨细胞表型中的作用；进一步研究YAP调控p21的机制，以及YAP/p21信号轴在调控细胞增殖、细胞衰老中的作用；进一步阐述YAP/p21与DNA损伤、化疗敏感性的关系。研究方法：1、通过免疫组化检测YAP在软骨组织，软骨肉瘤，骨关节炎软骨组织中表达及分布情况2、利用CCK-8细胞活性实验、EdU实验以及克隆成形实验检测YAP在细胞增殖中的作用3、通过流式细胞术检测YAP在细胞周期与细胞凋亡中的作用4、使用Westernblot检测周期蛋白（p21、p27、

5、P53、CyclinD1等）、凋亡相关蛋白（CleavedCaspase-3、Bcl-xL和PARP）、通路蛋白（YAP、TAZ、CYR61等）、DNA损伤相关蛋白（γ-H2AX、H2AX等）、细胞衰老相关蛋白（p16）以及其他相关蛋白的表达变化5、通过细胞免疫荧光检测YAP在软骨细胞系（CHON-001）和软骨肉瘤细胞系（SW1353和Hs819.T）中的定位情况6、利用衰老相关的β-半乳糖苷酶染色实验检测细胞衰老7、通过体内异种移植肿瘤（裸鼠成瘤）实验，探究YAP/p21在肿瘤生长中的作用8、利用小干扰RNA(siRNA

6、)以及YAP的慢病毒介导的shRNA敲低YAP的表达，结合YAP的HA质粒过表达YAP的表达，证明YAP在上述实验中作用9、通过彗星实验检测DNA损伤情况，进而评估YAP/p21与化疗药物的敏感性的关系III暨南大学硕士学位论文研究结果：1、软骨肉瘤的生长需要核YAP的表达2、YAP/TEAD介导细胞周期阻滞并引起细胞衰老3、敲低YAP引起的细胞生长抑制与体内p21的表达有关4、YAP表达缺失引起DNA损伤并且与化疗敏感性相关5、YAP1通过非依赖p53和Sp1的方式调节p21的表达及其介导的细胞衰老6、靶向致癌基因YAP和

7、p21促进消除由治疗诱导的衰老细胞结论：1、YAP在软骨肉瘤中发挥着重要作用，敲低YAP的表达引起软骨肉瘤细胞的细胞周期G1期的阻滞、细胞凋亡与细胞衰老2、YAP负调控p21引起体内及体外细胞生长抑制及细胞衰老3、YAP负调控p21引起DNA损伤反应，并增加化疗药物的敏感性关键词：YAP，p21，DDR，软骨表型，衰老IV暨南大学硕士学位论文ThemechanismofYAPnegativelyregulatestheexpressionofp21affectingthechondrocytephenotypesenesce

8、nceAbstractObjective:ThepurposeofthisstudyistoelucidatetheroleofYAPinmaintainingthephenotypeofchondrocytesbyinvestigatingthesubcellularlocalizati