新橙皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的抑制作用及其对OVA诱导过敏性哮喘的影响

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1、分类号：TS201单位代码：10183研究生学号：2016464013密级：公开吉林大学硕士学位论文（专业学位）新橙皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的抑制作用及其对OVA诱导过敏性哮喘的影响EffectsofNeohesperidininDegranulationofRBL-2H3CellsandAllergicAsthmaDiseaseInducedbyOVA作者姓名：杨艳萍类别：工程硕士领域（方向）：食品安全与食物过敏指导教师：时晓磊副教授培养单位：食品科学与工程学院2018年6月新橙皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的抑制作用及其

2、对OVA诱导过敏性哮喘的影响EffectsofNeohesperidininDegranulationofRBL-2H3CellsandAllergicAsthmaDiseaseInducedbyOVA作者姓名：杨艳萍领域（方向）：食品安全与食物过敏指导教师：时晓磊副教授类别：工程硕士答辩日期：2018年5月28日中文摘要新橙皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的抑制作用及其对OVA诱导过敏性哮喘的影响本研究受国家自然科学基金青年项目支持，（项目编号：31201295）。食物过敏是一种常见的过敏性疾病，能够引发恶心、呕吐、腹泻、过敏性哮

3、喘、过敏性皮炎、过敏性鼻炎、过敏性休克等症状。食物过敏的发病率呈逐年上升趋势，给家庭和社会造成严重负担。新橙皮苷是一种二氢黄酮苷类化合物，为芸香科柑橘属植物次生代谢产物，广泛分布于多种植物中，是一种天然的强抗氧化剂，具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒活性以及保护心血管系统的作用。但未见新橙皮苷对食物过敏引发的过敏性哮喘的影响方面的应用。本论文通过体内和体外实验对新橙皮苷可能存在的抗过敏活性进行研究。考察新橙皮苷对抗原诱导RBL-2H3细胞脱颗粒的影响；明确新橙皮苷对OVA诱导过敏性哮喘小鼠的影响。具体研究内容如下：1.体外实验：采用MTT法

4、检测新橙皮苷对RBL-2H3细胞活性的影响，采用显色法检测RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶（β-HEX）的释放情况，利用荧光显微镜法观察新橙皮苷对细胞活化脱颗粒胞内钙离子变化的影响。结果表明：在不同浓度的新橙皮苷作用下，细胞存活率均保持在90%以上，且RBL-2H3细胞活性不随新橙皮苷浓度的增加而降低，说明新橙皮苷对细胞活性无显著性影响。不同浓度的新橙皮苷能够抑制由抗原诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒β-HEX的释放，在新橙皮苷的浓度为3.13μmol/L时，对β-HEX释放的抑制作用最好。新橙皮苷能抑制细胞活化脱颗粒胞内钙离子浓

5、度的升高。2.体内实验：建立小鼠过敏性哮喘模型，获取样品。称量小鼠胸腺和脾脏质量并计算胸腺和脾脏指数；采用ELISA测定血清中抗体IgE和IgG1的水平并检测各组小鼠肺泡灌洗液（BALF）中Th2细胞因子IL-4和IL-5以及Th1细胞因子++IFN-γ的水平；通过流式细胞术检测各组小鼠脾脏中CD4、CD8T细胞的数量变化；通过肺组织HE染色观察小鼠肺组织炎性细胞浸润情况。结果表明：新橙皮苷对小鼠血清中的OVA特异性IgE与IgG1的水平影响不大，但是新橙皮苷能降低小鼠BALF中IL-4和IL-5的水平，升高BALF中IFN-γ的

6、水平，降低小鼠++脾脏中CD4T细胞的比例，升高CD8T细胞的比例。新橙皮苷还能减轻肺组织中嗜酸性粒细胞的浸润情况，缓解肺泡及支气管水肿症状并改善支气管、血管周围及管腔内的炎性细胞浸润情况。关键词：新橙皮苷；RBL-2H3；脱颗粒；抑制；过敏性哮喘AbstractEffectsofNeohesperidininDegranulationofRBL-2H3CellsandAllergicAsthmaDiseaseInducedbyOVATheworkwassupportedbytheNationalNaturalScienceFou

7、ndation(Grantnumber:31201295).Foodallergyisoneofthemostcommonallergicdiseaseswhichassociatedwithnausea,vomiting,diarrhoea,allergicasthma,allergicdermatitis,allergicrhinitisandallergicshock.Itsincidencemanifestsarisingtendencywitheachpassingyear,causedaheavyburdenforpa

8、tient'sfamilyandthesociety.Neohesperidinisakindofdihydroflavoneglycoside,whichbelongstothemetabolitesofcitrusplantsinrutacea