T-2毒素脱毒菌株的筛选及脱毒特性研究

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1、工程硕士学位论文T-2毒素脱毒菌株的筛选及脱毒特性研究作者姓名向雨珂工程领域食品工程校内指导教师熊犍校外指导教师张晓琳所在学院食品科学与工程学院论文提交日期2018年5月ScreeningofT-2toxindetoxificationstrainsandstudyofthedetoxificationcharacteristicsADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：XiangYukeSupervisor：Prof.XiongJianSouthChinaU

2、niversityofTechnologyGuangzhou,China分类号：TS213.4学校代号：10561学号：201521021523华南理工大学硕士学位论文T-2毒素脱毒菌株的筛选及脱毒特性研究作者姓名：向雨珂指导教师姓名、职称：熊犍教授申请学位级别：工程硕士工程领域名称：食品工程论文形式：ꇶ产品研发ꇶ工程设计ꇶ应用研究ꇶ工程/项目管理ꇶ调研报告研究方向：粮油加工论文提交日期：2018年04月20日论文答辩日期：2018年05月26日学位授予单位：华南理工大学学位授予日期：年月日答辩委员会成员：夏枫耿、熊犍、陈

3、中、黄立新、胡飞、林伟锋、李丹丹主席：夏枫耿委员：熊犍、陈中、黄立新、胡飞摘要T-2毒素是由镰孢菌属产生的一类单端胞霉烯族化合物，主要存在于霉变的粮食作物和饲料中，含量随环境湿度的增加而增大。T-2毒素可进行生物蓄积作用和通过食物链传递，严重损害人和动物体的安全健康。实验从江浙地区受镰刀菌属霉菌污染严重的土样中筛选出对T-2毒素有高效清除作用的菌株，探究菌株脱毒机理及特性。结果如下：（1）将231份土样分为50组，通过96孔板高通量筛选得到15组阳性混合菌液，从阳性菌液中分离得到52株单菌种。进一步筛选得到A24、B7、B

4、14、B22、B25、B26共6株能够高效清除体系中T-2毒素的单菌种。经16SrDNA鉴定，A24为微歧杆菌、B7为人苍白杆菌、B14为氧化微杆菌、B22为木糖氧化无色杆菌、B25为生癌肠杆菌、B26为暹罗芽孢杆菌。（2）B14和B26生长到稳定期需要14.0h，A24需要16.0h。B26稳定期的OD600约为7.60；B14稳定期的OD600为4.50。A24、B14、B26分别在15.0h、12.0h和16.0h时清除了体系中95.00%以上的T-2毒素。（3）A24、B14、B26对T-2毒素都有吸附作用，B14

5、细胞吸附T-2毒素能力最强。B26对T-2毒素的脱毒作用主要源于胞内酶，A24和B14主要是胞外酶脱毒。（4）脱毒完成后，B14的HPLC图谱中能明显检测到T-2毒素脱毒产物的存在。BLYR检测菌株B14的T-2毒素脱毒产物的毒性，共培养0.0h样品的IC0=0.7747，共培20养24h样品的IC24=4.4363，脱毒产物的毒性不及T-2毒素本身毒性的1/4000。20（5）菌株B14的T-2毒素代谢酶中存在丝氨酸蛋白酶或巯基蛋白酶，以及含有金属离子的酶。菌株B14在24.0-37.0℃，pH=7.0-8.0时上清液对

6、T-2毒素脱毒效果最好。（6）LC-MS分析脱毒产物，菌株B14主要是通过脱乙酰基和脱环氧化作用将T-2毒素代谢成为低毒产物。总共检测到7种代谢产物，其中4种产物并未有过文献报道。（7）以酵母提取物0.50%、胰蛋白胨1.00%、氯化钠1.00%为基础，通过培养基优化可知，蔗糖（2.00%）、大豆蛋白胨（0.50%）、磷酸氢二钾（5.00mM）、pH=7.0时的组合为最有利于菌株B14生长代谢。（8）B14菌液上清中代谢T-2毒素的酶在pH=8.0、10.00%的盐浓度洗脱条件下，可通过阴离子柱在AKTA上被分离出来。关键

7、词：T-2毒素；生物脱毒；筛选；培养IABSTRATET-2toxinisakindoftrichotheceneproducedbyFusarium,whichmainlyexistsinmoldycropsandfeeds.Thecontentoftoxinincreaseswiththeincreaseofenvironmentalhumidity.T-2toxincanbeusedforbioaccumulationandtransmissionthroughfoodchain.Itisharmfultothesa

8、fetyandhealthofpeopleandanimals.Inthisexperiment,themicroorganismswithhigheffectivescavengingeffectonT-2toxinwereobtainedfromsoilsampleswheresevereconta