8981基因转化旱稻品种纯合体鉴定及分析

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1、＿：９４３：公开中图分类号Ｑ．２密级ＵＤＣ：５８０学校代码：１００８２ＨＥＢＥＩＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ〇ＦＳＣＩＥＮＣＥＡＮＤＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ硕士学位论文９８１基因转化旱稻品种纯合体鉴定及分析论文作者：李园园指导教师：李冬杰教授副指导教师：朱昀副教授申请学位类别：理学硕士学科、领域：植物学所在单位：生物科学与工程学院答辩日期：２０１８年６月ClassifiedIndex：Q943.2SecrecyRate：PublicizedUDC：580UniversityCode：10082HebeiUnive

2、rsityofScienceandTechnologyDissertationfortheMasterDegreeIdentificationandAnalysisof8981GeneticallyUplandRiceCultivarsCandidate：LiYuanyuanSupervisor:Prof.LiDongjieAssociateSupervisor：Associate.Prof.ZhuYunAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpeciality：BotanyEmployer：SchoolofBiolo

3、gicalScienceandEngineeringDateofOralExamination:June,2018摘要摘要本课题选用8981基因为目的基因，通过农杆菌转化法将目的基因转入植物基因组中，本课题主要进行后期鉴定，利用除草剂、PCR、生理筛选、Southern杂交以及Tail-PCR等技术，最终获得能够稳定遗传的转基因旱稻新品系。具体研究结果有以下几点：（1）候选纯合株系的筛选在试验田采用浓度为0.8mg/mL的草铵膦进行喷洒，筛选出97个具有抗除草剂的抗性株系进行PCR鉴定，筛选出候选纯合株系93个，杂合株系4个。（2）抗性株系鉴定及突变体筛选将筛

4、选出的93个候选纯合株系，通过NaCl胁迫后得到8个比野生型耐盐性强的株系、PEG胁迫后得到7个比野生型抗旱性强的株系、极限实验筛选出高抗除草剂的株系93个以及目前最高的除草剂耐受浓度8mg/mL；并获得了具有特殊农艺性状的矮杆株系6个以及籽粒饱满的株系33个。（3）Southern杂交分析本实验采用地高辛试剂盒进行Southern杂交，从25个株系中筛选出了能够稳定遗传的单拷贝转基因株系2个；二拷贝转基因株系12个；多拷贝转基因株系11个。（4）TAIL-PCR分析目的基因的插入位点将得到的能够稳定遗传的2个单拷贝转基因株系2-9-5、2-19-5分别进行T

5、AIL-PCR鉴定，确定了株系2-9-5目的基因的插入位点在10号染色体Os10g0351500基因中，此基因编码Tyrosineprotein；株系2-19-5目的基因的插入位点在1号染色体Os01g0884300基因中，此基因编码NAWprotein。关键词旱稻；筛选；PCR；除草剂；Southern杂交；TAIL-PCR；IAbstractAbstractThistopicselects8981genesasthetargetgene,throughAgrobacteriumtransformationmethodtotransferthetargetg

6、eneintouplandrice’sgenome,andthistopicmainlycarriesonthelateridentification,usingtheherbicide,thePCR,thephysiologyscreening,SouthernhybridizationandtheTAIL-PCR.Finallyweobtainanewuplandricesystemwhichissteadyandhereditary.Thespecificfindingsareasfollows:(1)CandidateHomozygousStrainS

7、creening.Intheexperimentalplots,throughsprayedtheconcentrationof0.8mg/mlammoniumphosphate,97resistantstrainswithherbicideresistancewerescreenedforPCRidentification,then93candidateshavebeenscreenedoutand4strainsaremixed.(2)IdentificationofResistanceStrainsandSelectionofMutants.AfterN

8、aClstress,8ofthe93c