OsANN7干涉转基因水稻纯合体的筛选和鉴定

《OsANN7干涉转基因水稻纯合体的筛选和鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、本科生毕业论文设计题目OsANN7干涉转基因水稻纯合体的筛选及鉴定作者姓名陈珍指导教师朱正歌所在学院生命科学学院专业（系）生物科学班级（届）2017届完成日期2017年4月200目录中文摘要、关键词（1）1.引言（1）2.材料和方法（1）2.1材料（1）2.2方法（2）3.结果分析（3）3.1抗潮霉素植株的观察记录（3）DNA提取验证及PCR验证（4）3.3第一次RNA提取（4）3.4反转录及PCR验证（5）3.5第二次RNA提取（5）4.讨论（5）参考文献（6）英文摘要、关键词（7）OsANN7干涉转基因水稻纯合体的筛选及鉴定作者：

2、陈珍指导教师：朱正歌摘要0$ANN7是水稻膜联蛋白家族的一员，有研究表明非生物胁迫可以诱导水稻膜联蛋白基因的表达，例如热，低温，盐，干旱等⑴，表明水稻膜联蛋白可能在植物响应环境挑战的过程中发挥重要作用⑸。研究植物膜联蛋白在植物逆境应答和非生物胁迫适应屮的功能具有重要意义。本实验通过对干涉转基因水稻的检测，为水稻抗逆性的分子机制研究提供突变体材料。本实验检测了OsANN7的3个干涉转基因水稻株系，分别种植种子，观察记录各植株抗潮霉素株数，以口本晴野生型为对照，分別提取基因组DNA进行PCR检测，分别提収RNA进行反转录及PCR检测。发现

3、所检测的3个株系均无潮霉素敏感植株,DNA检测结果显示3个株系转基因成功，RNA检测发现在OsANN7R3-①和OsANN7R20-②干涉转基因植株中，0MMV7表达量与野生型相比均下调。关键词OsANN7膜联蛋白干涉水稻1・引言水稻作为一种重要的粮食作物，在解决全世界粮食问题上具有很重要的地位。对于水稻抗逆性的研究可以为培育更能适应恶劣环境的水稻株系提供理论依据。植物膜联蛋白在调节植物生长，发育和响应环境胁迫的不同方面发挥着重要作用⑸，目前研究较深入的是拟南芥的膜联蛋白⑷，对于水稻膜联蛋白的研究还比较少。水稻膜联蛋白家族目前已知的基

4、因有10个⑴，它们在水稻抗逆的过程屮起着作用。例如，有研究表明OMMV/基因的过表达可以使S0D（超氧化物岐化酶）和CAT（过氧化氢酶）活性增高，用来调节H2O2含量和氧化还原反应的稳态，还可以提供整体细胞保护，防止非生物胁迫诱发的损伤，在体外也具有钙结合和ATP酶活性⑹。目前只知道水稻膜联蛋白在植物抗逆的过程中起着作用，但各个膜联蛋白在逆境应答中的功能和抗逆性的机制在很大程度上不清楚，还需要更进一步的研究。RNA干涉是由外源和内源性双链RNA介导的、在转录后mRTA水平关闭响应基因表达的过程宀），即导致基因沉默。在対植物的研究中，R

5、NA干涉技术被普遍应用于植物抗病毒、作物遗传改良等方面勺。目前已有许多利用RNAi技术研究水稻基因的研究，例如水稻磷转运蛋白基因生理功能的研究，水稻淀粉极限糊精酚基因的研究等，取得了不错的成果4役由此可见，RNAi技术也可用于水稻膜联蛋白与抗逆性的研究中，构建一系列膜联蛋白基因表达量下调的干涉转基因材料。OMMV7是水稻膜联蛋白家族的一员，我们在实验中选了OMMV7的3个RWA干涉转基因水稻，用水稻日本晴作为对照，检测了RNA干涉转基因水稻的纯合度及目的基因的表达量，为进一步分子机制研究提供研究基础。材料和方法2・1材料2.1.1株系

6、3个干涉转基因水稻株系（R3-①,R3-⑤，R16-②，R16-③，R20-②，R20-③）和日本晴野生型水稻株系，保存于植物遗传发育实验室。2.1.2引物303introF与OMMV7RNAiR用于DMA检测，OMC77/V引物用于内参的调节，OMMV7半定量用于RNA检测。2.1.3主要试剂与仪器潮霉素，氯仿/异戊醇/乙醇,异丙醇,无水乙醇，TRIZOL试剂，DEPC水,PCR水,dNTP,TaqBuffer,Taq酶，PH调节器，4°C离心机，旋涡振荡器，瞬时离心机，冰盒，PCR仪，电泳仪，超净工作台，凝胶扫描仪，高压蒸汽灭菌锅

7、，2卩1移液枪，20卩1移液枪，100u1移液枪，200U1移液枪，1000111移液枪等。2.2方法2.2.1培养基的配置所用培养基为两种，添加潮霉素的l/2Ms培养基和不添加潮霉素的l/2Ms培养基，培养基配方为：5m1Ms大量溶液，0.5mlMs微量溶液，0.5mlMs有机溶液，0.5mlFe-EDTA溶液及1.5g蔗糖，用蒸僧水定容至100ml,调PII至5.78o将其中80mll/2Ms培养基按照上述方法配置后，再加入潮霉素，加入0.64g琼脂，剩余20ml加入0.16g琼脂,然后用NaOH和HCL调节PH至5.78,放入高

8、压蒸汽灭菌锅中灭菌。2.2.2种子种植分别取6个转基因水稻种子各20粒，日本晴水稻种子50粒，去皮，加入lml50%Naclo溶液消毒20min,去除Naclo溶液，再加入lml50%Naclo消毒15min,放入超净台