p16甲基化在阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移中的作用及机制研究

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1、p16学校代码：10286分类号：__R543.3__密级：公开甲UDC：__616__基学号：159266化在阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移中的作p16甲基化在阿托伐他汀抑制VSMCs增用及机殖迁移中的作用及机制研究制研究研究生姓名：朱伯谦导师姓名：汤成春朱伯谦申请学位类别医学博士学位授予单位东南大学一级学科名称临床医学论文答辩日期2018年5月31日二级学科名称内科学学位授予日期2018年6月20日东南大答辩委员会主席李东野评阅人学2018年06月04日博士学位论文p16甲基化在阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移中的作用及机制研究专业名称：内科学（心血管）研究生姓名：

2、朱伯谦导师姓名：汤成春教授本论文获国家自然科学基金项目（No.81370225，No.81670237）资助。RolesandMechanismsofp16MethylationinAtorvastatin-inducedInhibitionofVSMCsProliferationandMigrationADissertationSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofDoctorofMedicineBYZhuBo-qianSupervisedbyProfessorTangCheng-chunMedicalS

3、choolSoutheastUniversityApril20182东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司、万方数据电子出版社、北京万方数据股

4、份有限公司有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括以电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括以电子信息形式刊登）授权东南大学研究生院办理。研究生签名：导师签名：日期：中文摘要中文摘要第一部分p16对阿托伐他汀抑制VSMCs增殖迁移作用的影响目的：研究阿托伐他汀对血管平滑肌细胞（vascularsmoothmusclecells，VSMCs）增殖迁移及凋亡的作用，以及p16在其中发挥的作用。

5、方法：原代培养大鼠主动脉VSMCs并进行免疫荧光鉴定；以不同浓度阿托伐他汀（0、0.5、1.0、2.0μM）干预VSMCs，CCK-8检测阿托伐他汀对VSMCs增殖的作用；Transwell小室检测阿托伐他汀对VSMCs迁移的作用；Annexin-V/PI双染色法检测阿托伐他汀对VSMCs凋亡的作用；q-PCR及Westernblot检测阿托伐他汀对p16、p53表达的影响；用短发夹RNA（shRNA）沉默p16基因，观察p16介导阿托伐他汀对VSMCs增殖迁移的影响。结果：（1）与对照组相比，阿托伐他汀以浓度依赖性方式抑制VSMCs增殖迁移（P＜0.05）；（2）与对照

6、组相比，阿托伐他汀以浓度依赖性方式促进VSMCs凋亡，并上调p53蛋白表达；（3）与对照组相比，阿托伐他汀以浓度和时间依赖性方式上调p16mRNA及蛋白表达（P＜0.05）；（4）沉默p16基因后，阿托伐他汀对VSMCs增殖迁移的抑制作用均被逆转（P＜0.05）。结论：阿托伐他汀通过调控p16表达影响VSMCs增殖迁移及凋亡。关键词：阿托伐他汀；VSMCs；p16；增殖迁移；凋亡第二部分DNA甲基化介导阿托伐他汀调控p16表达的机制研究目的：研究DNA甲基化在阿托伐他汀调控p16表达中的作用及机制。方法：以不同浓度阿托伐他汀（0、0.5、1.0、2.0μM）、5-氮杂胞苷

7、(5-Azacytidine，AZA)（0、0.5、1.0μM）干预VSMCs，q-PCR及Westernblot检测DNA甲基化转移酶（DNAmethyltransferases，DNMTs）（DNMT1、DNMT3a、DNMT3b）及p16的表达，亚硫酸氢盐基因组测序法检测p16启动子区CpG岛甲基化水平；建立DNMT1过表达与沉默细胞模型，q-PCR及Westernblot检测p16的表达。结果：（1）与对照组相比，AZA及阿托伐他汀组DNMT1表达明显下调，而I东南大学博士学位论文DNMT3a和DNMT3b表达无明显改