放疗联合AZD3759治疗EGFR突变阳性非小细胞肺癌脑转移的临床前研究

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1、分类号：Ｒ７３０．５５学校代码：１００６２密级：学号：２０１５６０１０９５ＴＩＡＮＪＩＮＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ博士学位论文ＤＯＣＴＯＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ论文题目：放疗联合ＡＺＤ３７５９治疗ＥＧＦＲ突变阳性非小细胞肺癌脑转移的临床前研究ＴＩＴＬＥＰｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｙｏｆＡＺＤ３７５９ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｒａｄｉａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂｒａｉｎｍｅｔａｓｔａｓｉｓｆｒｏｍＥＧＦＲｍｕｔａｎｔＮＳＣＬＣ一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学

2、论文作者：李雪导师：于金明院士天津医科大学研究生院二零一八年五月分类号：Ｒ７３０．５５学校代码：１００６２２０１５６０１０９５密级：学号：学位类别：科学学位０专业学位口学科门类：医学ＴＩＡＮＪＩＮＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ博士学位论文ＤＯＣＴＯＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ论文题目：放疗联合ＡＺＤ３７５９治疗ＥＧＦＲ突变阳性非小细胞肺癌脑转移的临床前研究ＴＩＴＬＥＰｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｙｏｆＡＺＤ３７５９ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｒａｄｉａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｔｒｅａｔ

3、ｍｅｎｔｏｆｂｒａｉｎｍｅｔａｓｔａｓｉｓｆｒｏｍＥＧＦＲｍｕｔａｎｔＮＳＣＬＣ一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：李雪导师：于金明院士导师组成员：邢力刚教授天津医科大学研宄生院二零一八年五月学位论文原创性声明本人郑重声明；所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果４除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研究一成果，与我同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：．曰期年夕

4、月２日１学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即；学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供査阋和借阅６同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库９保密在年解密后适用本授权书．ＣＬ本论文属于不保密。“厂（清在以Ｌ方框内打）匕月：＾曰期日学位论文作者签名ｆ：＞ｒｓ年ｙ导师签名／：＾ｊａ期：年Ｙ月上令天津医科大学博士学位论文中文摘要目的：１ＡＺＤ。．探讨放疗联合３７５９是否具有协同抗肿

5、瘤作用及其潜在机制２ＡＺＤ。．探讨颅脑放疗是否会影响３７５９的中枢神经系统渗透性３．体内验证放疗联合ＡＺＤ３７５９治疗脑转移的的疗效，并探讨其最佳治疗方案。方法：１．体外培养ＥＧＦＲ野生型（Ｈ２２６和Ｈ２２２８）及ＥＧＦＲ敏感突变型（Ｈ３２５５，ＥＧＦＲＬ８５８Ｒ和ＰＣ」９ＥＧＦＲＮＳＣＬＣ细胞ＭＴＳ１９ｄｅｌ，），通过实验和克隆形成实验探讨ＡＺＤ３７５９在不同ＥＧＦＲ突变状态细胞中是否具有放疗增敏作用。同时给予不同浓度的ＡＺＤ３７５９，探讨ＡＺＤ３７５９浓度对与放疗联合应用时抗肿瘤疗效的影响。２．ＰＣ９细胞ＤＮＡ体外培养，分别给予不同

6、处理，通过免疫荧光实验检测细胞中双链损伤情况，通过流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡情况，探讨放疗和／或ＡＺＤ３７５９对细胞ＤＮＡ损伤、细胞周期及细胞凋亡的影响。３．体外培养ＰＣＪ细胞，分别给予不同处理，通过ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验检测ＥＧＦＲ及其下游信号通路（ＥＧＦＲ，ｐＥＧＦＲＹ１０６８，ＥＲＫ１／２，ｐＥＲＫ１／２，ＡＫＴ，ｐＡＫＴＳ４７３）、同源重组连接ＤＮＡ修复途径的主要调控蛋白ｒａｄ５１、非同源重组末端连接途径的主要调控蛋白ＤＮＡｉＫｃｓ、Ｇ２／Ｍ期调控蛋白ｃｄｃ２及其活化蛋白ｐｃｄｃ２Ｙ１５、以及调亡相关蛋白ｃｌｅａ

7、ｖｅｄＰＡＲＰ和ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ３的表达情况；通过核质分离探讨ＡＺＤ３７５９及放疗对胞浆和胞核内ＥＧＦＲ表达及其活性的影响；通过免疫共沉淀实验探讨ＡＺＤ３７５９及放疗对胞核内ＥＧＦＲ／ＤＮＡＰＫｃｓ复合物表达的影响。以上实验的目的是探讨ＡＺＤ３７５９与放疗协同作用的潜在机制。４．通过脑立体定位仪原位注射肿瘤细胞建立脑转移模型，分别给予不同处理，分析不同时间点（ＡＺＤ３７５９给药后２、４、８、１６、２４小时）小鼠脑组织及血液中ＡＺＤ３７５９的药物