阿帕替尼抗胆道肿瘤细胞作用及机制研究

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1、＿＿够夫摩硕士学位论文阿帕替尼抗胆道肿瘤细胞作用及机制研究学科专业内科学学位类型临床医学硕士专业学位研究生姓名王露停导师姓名、职称段华新主任医师论文编号Ｓ１８０４６３３湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇一八年六月分类号密级学校代码１０５４２学号２０１５７０２００８１５阿帕替尼抗胆道肿瘤细胞作用及机制研究－ｔｕｍｏｒｆｆｅｃｔＡｎｔｉｅａｎｄＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＡｐａｔｉｎｉｂｏｎｂｉｌｉａｒｙｔｒａｃｔｃａｎｅｅｒｃｅｌｌｓ．王露鋅研究生姓名指导教师姓名、职称段华新主任医师

2、学科专业内科学研究方向血液肿瘤科湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇—八年六月摘要背景和目的：ｎｃｅ一胆道癌（ｂｉｌｉａｒｙｔｒａｃｔｃａｒ，ＢＴＣ）是组罕见于胆道系统的异质性肿瘤，可分为胆囊癌（ＧａｌｌｂｌａｄｄｅｒＮｅｏｐｌａｓｍｓ）、肝内胆管癌（ｉＣＣＡ）、肝门部胆管癌（ＣＣＡ）、远端胆管癌（ｄＣＣＡ）。在实ｐ际临床工作中，该类疾病确诊时分期较晚，５年生存率小于５％，外科一手术是胆道癌可能获得治愈的唯治疗方法，但可接受手术切除机３会的患者不超过１／，进展期胆道癌患者的主要治疗手段是系统化疗ＮＣＣＮ推荐一线化疗方案，但

3、疗效差、生存，顺铀联合吉西他滨为期短一。胆道癌目前无合适靶向治疗药物，阿帕替尼作为种靶向－可抑制ｃ－Ｋ－－ＶＥＧＦＲ２的小分子ＴＫＩｉｔ，Ｒｅｔ，ＰＤＧＦＲ，ｓｒｃ，也Ｐ以及ｃ等酪氨酸激酶，ＣＦＤＡ于２０１４年１２月批准阿帕替尼可用于晚期胃腺癌或胃－食管结合部腺癌三线以上的治疗，也发现在乳腺癌、非小细一胞肺癌、肝癌等肿瘤效果明显，因此进步探索胆道癌的发病机制，寻求靶向治疗具有深远意义。前期临床研宄发现两例治疗后进展的胆道癌患者经阿帕替尼治疗后，ＰＦＳ＞６个月，显示了阿帕替尼对胆道癌可喜的临床疗效。本实验拟通过ＭＴＴ试验、流式试验、划痕试验ｌｌ、ｔｍ

4、ｎｓｗｅ试验、克隆形成试验探讨阿帕替尼对胆道肿瘤细胞系增殖、凋亡、迀移、侵袭及集落形成影响。通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ初步检测信号通路蛋白水平变化，分析可能作用的信号通路。希望为Ｉ体内试验、临床试验提供理论基础，为胆道肿瘤患者提供新的治疗手段。方法：１－Ｈｃｃｃ－．人胆道肿瘤细胞系ＧＢＣＳＤ、９８１０、ＲＢＥ细胞经不同浓度阿帕替尼处理后，分别通过ＭＴＴ、流式细胞术、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭试验、划痕试验、平板克隆形成试验分析胆道肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、迀移和集落形成能力；２．通过ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验检测经不同浓度阿帕替尼处理后－

5、－－－－－ＲＡＳＲＡＦＥＲＫＶＥＧＦＲ２ＭＥＫ通路、ｐｓｒｃ、Ｅ钙粘蛋白、基质金属蛋白酶。、凋亡调节蛋白等相关蛋白表达变化结果：－１－Ｈｃｃｃ－．人胆道肿瘤细胞系ＧＢＣＳＤ、９８１０、ＲＢＥ细胞在ｌ５ｄ内随时间延长，增殖率均增加，阿帕替尼可抑制其增殖，呈浓度依赖性，随阿帕替尼浓度升高，抑制作用增强；－２．ＧＢＣＳＤＲＢＥ细胞凋亡，阿帕替尼可促进人胆道肿瘤细胞系、呈浓度依赖性，随阿帕替尼浓度升高，促凋亡作用均增加，但－９８对胆管癌细胞Ｈｃｃｃ１０促凋亡作用不明显；３－－．阿帕替尼可抑制人胆道肿瘤细胞系ＧＢＣＳＤ、Ｈｃｃｃ９８１０、ＲＢＥ细胞侵袭、迀

6、移，呈浓度依赖性，随阿帕替尼浓度升高，抑制作用增加；４．阿帕替尼减少人胆道肿瘤细胞系集落形成，呈浓度依赖性，随着阿帕替尼浓度升高，抑制作用增强；５－－．阿帕替尼可下调人胆道肿瘤细胞系ＧＢＣＳＤ、Ｈｃｃｃ９８１０、ＲＢＥ－ＶＥＧＦＲ２表达－／－细胞Ｐ，进而下调下游的信号ｐＥＲＫｌ２、ｋｒａｓ表达，呈浓度依赖性，随着阿帕替尼浓度的增加，抑制作用增ＩＩ强－ＲＡＳ－ＲＡＦ－ＭＥＫ－ＥＲＫ途，阿帕替尼通过ＶＥＧＦＲ２径抑制增殖。６－－－．人胆道肿瘤细胞系ＧＢＣＳＤ、Ｈｃｃｃ９８１０、ＲＢＥ细胞存在ｐｓｒｃ－－ｓ表达。阿帕替尼可上调Ｅ钙粘蛋白，下调ｐｒｃ、

7、基质金属蛋白酶，呈浓度依赖性，随阿帕替尼浓度升高，抑制作用增强。－表明阿帕替尼可通过ＩＧ向ｓｒｃ后调节Ｅ－街粘蛋白及基质金ｐ属蛋白酶的表达量，最终达到抑制肿瘤侵袭、迀移。７－－．阿帕替尼可上调人胆道肿瘤细胞系ＧＢＣＳＤ９８１０ＲＢＥ、Ｈｃｃｃ、２１、Ｂａｘ－细胞促凋亡蛋白ｐ、ｃａｓｐａｓｅ３，下调抗凋亡蛋白Ｂｃｌ２，呈浓度依赖性，ｐ５３蛋白水平无明显改变。结论：－ＳＤ－阿帕替尼可抑制人胆道肿瘤细胞系Ｇ