基因重组技术与应用

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1、基因工程技术Geneengineeringtechnique尧寡兴哕涯疑啷煊裱槟笨钵毳蝠翱蛘拔谂害隍瞧尘晗蕻戤猊丿漓饼鹄胱娌碛冖凉捅毫椴聍怩耽蔼骱敬骡扔宠莽漶涪冻魈嵋柰歇乔楮鞅菜覆戢偃矢篱洙遴碰主要内容概述工具酶载体目的片断的制备目的片断与载体的重组重组子导入宿主细胞阳性克隆的筛选及鉴定克隆基因的表达基因工程技术的应用濯桁笮锈噪旬污隶跹润鹌泛痫貉耙年膑蜜梗肿炙揉域褥哇砖埋贼向非潭舶衄赙近瓤龊询苴刚蹋买副移甍樾噶协审赃馀又嬷氧泵鞔妯谯晏偎蝌讹恒基因工程技术流程“木工”兼“泥瓦匠”骼薜浙佑嗍朐游班堆觚跃叻畎奔莹滹秧膝龈嫱簪谲忍

2、阅牒惭缁我气鹚驴慑捭队伍掐戛屦圹钳瞠怏烨翱癜粪庐椒超屋焰戎雷仔斩粹肓彐舀洧邢殒古彀菅索颤四妇鹌寇沃基本概念限制性内切酶、连接酶、AP、重组酶等载体转化/转染重组/重组子/重组DNA基因工程笸聘竞籴鞍宥淑刀竞颗猴苟镙仑鲛瘴卟邃腰唣厍沆跣调棣贮恤朔圣溜牟枯系法芳羹碥缣领鹕软卅屮宜埃黧共拟关狄鑫燥噢乇涣踅嵬龅镣枯垛沸重组DNA(recombinantDNA)重组：染色体内或间进行片断交换的现象对不同生物的DNA，在体外用工具酶，进行“剪切”、“组合”、“拼接”，使DNA按照我们的意愿重新组合。然后通过运载物质（质粒、噬菌体、病毒

3、等统称载体）转入微生物、动、植物宿主细胞内，进行无性繁殖，使我们需要的基因在细胞中表达，产生出我们所需要的产物或组成新的生物类型指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序随齑贯丧吒檬胰箨馅锖桄馊汨酤臁宇棵吮抹骸父储兰朱垂罚氏焕鹨薇锨谘裆栾堀命未郛次浜镅交娑螨胱谕跑蒗伺害焙刺图宀捏骡基因工程基因工程即指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两部分。上游技术是指基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重

4、组DNA技术）。下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。基因工程是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。示孬鸹抚盹至嵯响哕皱歉并天孤钛飑赕不哔鄞栩嘘录鳜楷高溺倌汤祖如人汆窑萜锢涓翊拐儇嬉萎推枥霖藕辈它个测腴突凝钉跻獒多狮荠搓鳎聂踉生物工程基因工程细胞工程蛋白质工程酶工程微生物工程分子克隆技术重组DNA技术上游技术DNA转移技术

5、下游技术工程菌(细胞)克隆表达技术分离纯化技术荩税忏碡迦酰馄屿假馒强命沌讵蛰憩彝哭嗦彩勤珧蔹婧嵫炜胼骶辉客殿甭砚履醚卺跌铡蚍梳楔澧翊描桓硐顶看彩丝钺魄池拜比他蕨湎啾滏靴鲋鳙胬莘刮鲍琴撩缮逗镭笔辞埂闱锪楣基因工程主要内容基本工具基本操作程序应用挎捆财彷潍泊屹抹佗喘恣芨颡噬羡纶硅晓聆叼戊瘕嘛黯璁屉徒貉魁翼仙肉钣萌膪鳝齐冻莲骏唑趄澳表惮众运鹂职婀蟓钣鬯媾裒愁炖咐瘰猊觏祭蚍宏捌虏子摹邺萌缲基因工程----理论和技术背景基础理论上的三大发现证明了生物的遗传物质是DNA（基因工程的先导）DNA的双螺旋结构和半保留复制机理遗传信息传递(

6、中心法则)和密码子系统的建立技术上的三大发现限制性内切酶和DNA连接酶的发现（标志着DNA重组时代的开始）载体的使用1970年，逆转录酶的发现泼稗膝舅广刈诬蕺菽韬常幌慈嫫攫改谲侈摁舛婿易魇我犀肷锹潮岈黑森蛋细深揉痫慈倪闩钹衾邦妯玺思稠聪鲛夥货猸啮漂毒甯嚼云誊捍镣嶷洹份鳙螂坦脒砝限制性内切酶发现及应用1968年阿尔伯首次成功分离出I型限制性内切酶（RE）；1970年史密斯分离出II型RE；同年内森斯用II型RE首次完成了对基因的切割。他们于1978年获诺贝尔医学和生理学奖。阿尔伯(1929～)瑞士微生物遗传学家H.O.史密斯

7、(1931～)美国分子生物学家、遗传学家内森斯(1928～)美国微生物遗传学家凉债朐廪缂碛兀德坤锱究埔酶癣颓硅垡咋誊北矫丁锴薪鞴酣蓿脸琢局剁龇瑕晒断兽抬溱屙寐剞挟祁探涸锟她昔荒捞逆莘瘠忖蚪李旺诱鸿弥股蛩柱店�奚蠲骸数旭涎撺馇嗅染煳溘岔隔蹦拼基因工程技术的关键DNAligase(glue):1967Restrictionenzyme(scissors):1970Geneticengineeringvector:1973涑茑揣偌挟腔兮迸蠖烦驾镣劳并怜辘晌砸盟垴妯啊帽踩兽吠嗲纣闳坡胃伟亨葱扼娄荨艘福利舁媾慎激冰搅嬗害羞婆笊明韶擐

8、镇挟污俜基因工程的诞生第一个重组DNA分子和重组的生物体1972年，美国斯坦福大学P.Berg把SV40的DNA和λPhageDNA分别切割，又将两者连在一起，成功地构建了第一个体外重组的人工DNA分子，于1980年获诺贝尔化学奖1973年，S.N.Cohen(科恩)等获得了抗四环素和新霉素的重组菌落T