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1、基因突变重组与检测技术卫生部北京医院肖飞临床基因扩增实验室检测培训课程内容介绍二、基因重组技术三、基因突变的检测方法1.分子杂交技术3.高通量基因测序技术一、基因突变的产生与后果2.基因测序技术遗传中心法则回顾转录翻译逆转录DNARNA蛋白质复制第一节基因突变的产生与后果点突变基因缺失插入基因异位或重排表观遗传学基因突变的种类DNA分子中发生碱基对的替换、增添和缺失，而引起的基因序列的改变一、基因突变的定义┯┯┯┯ＡＴＧＣ ＴＡＣＧ ┷┷┷┷┯┯┯┯┯ＡＴＡＧＣ ＴＡＴＣＧ ┷┷┷┷┷┯┯┯┯ＡＴＧＣ ＴＡＣＧ ┷┷┷┷┯┯┯ＡＧＣ ＴＣＧ ┷┷┷┯┯┯┯ＡＣＧＣ ＴＧＣＧ
2、┷┷┷┷┯┯┯┯ＡＴＧＣ ＴＡＣＧ ┷┷┷┷增添缺失替换基因突变的原因和类型外界因素物理因素化学因素生物因素内部因素DNA修复功能减弱类型原因自然突变人工诱变基因突变的特点和意义意义：新基因产生的途径，是生物变异的根本来源，是生物进化的途径。特点普遍性:生物界中普遍存在随机性:可发生在生物个体发育任何时期不定向性：突变无明显偏倚低频性:自然状态下突变频率很低10－5-10-8多害少利性：多数有害,少数有利点突变的实例：镰刀型细胞贫血症的形成病人的血红蛋白的一条多肽链发生了什么变化？…－脯氨酸－谷氨酸－谷氨酸—……－脯氨酸－缬氨酸－谷氨酸—…正常异常CTTGAA谷氨酸缬氨酸DN
3、AmRNA氨基酸蛋白质正常异常GUACATGTA突变GAA_____原因_____原因根本直接点突变的实例：镰刀型细胞贫血症与肿瘤相关的常见点突变类型基因生长因子Sis,α-TGF,生长因子受体Erb(EGFR),HER2/neu,细胞信号传导因子H-,K-,N-ras,src,raf,转录因子N-,c-,L-myc,c-jun,fos细胞周期因子PRAD1(cyclinD)凋亡相关基因bcl-2,bcl-X肿瘤突变—取样的特殊性注意事项：必须从肿瘤组织中取样SampleSelectionbyLaserCaptureMicrodissection基因缺失基因缺失可以是1-2个
4、碱基，也可以是一个片段甚或一个外显子的缺失。基因片段的缺失可使该基因激活，转录异常，使基因正常的生物学功能丧失。在肿瘤发生中，多为抑癌基因的缺失。常见的抑癌基因缺失包括：RB-theretinoblastomagenp53genep16-INK4a基因插入基因插入多由病毒感染造成。病毒肿瘤人类T-淋巴细胞白血病病毒I型白血病人类巨细胞病毒（CMV）血液系统恶性肿瘤嗜肝DNA病毒肝癌人类乳头状瘤病毒（HPV）宫颈癌EB病毒（EBV）鼻咽癌基因异位与重排指细胞基因组中DNA顺序重新排列组合的现象淋巴细胞白血病t(9;22):BCR-ABLt(12;21):TEL-AML1t(1;
5、19):E2A-PBX1t(4;11):MLL-AF4髓细胞白血病Inv(16):CBF-MYH11t(8;22):AML-ETOt(9;22):BCR-ABL5'partnerClass3'partnerTMPRSS2IERGTMPRSS2IETV1TMPRSS2IETV4HERV-K_22q11.23IIETV1SLC45A3IIETV1C15orf21IIIETV1HNRPA2B1IVETV1KLK2IIETV4CANT1IIETV4ACSL3IIETV1SLC45A3IIERGFLJ35294IIETV1DDX5IVETV1TMPRSS2IETV5SLC45A3IIE
6、TV5EST14IIETV1HERVK17IIETV1ETV家族常见融合基因表观遗传学1.概念：基因的DNA序列不发生改变的情况下，基因的表达水平与功能发生改变，并产生可遗传的表型。2.特征:(1)可遗传；(2)可逆性；(3)DNA不变3.表观遗传学的现象：(1)DNA甲基化(2)组蛋白修饰(3)MicroRNA(4)Genomicimprinting(5)端粒酶表观遗传学——甲基化表观遗传学——组蛋白修饰组蛋白（去）乙酰化De/Acetylation组蛋白甲基化Methylation组蛋白磷酸化Phosphorylation组蛋白泛素化Ubiquitination组蛋白糖基
7、化ADP-Rybosilation组蛋白与Swi/Snf复合体的结合Swi/Snfcomplex,which,invitro,usestheenergyofATPhydrolysistodisrupthistone-DNAinteractions多数化学修饰的化学基团可以减少组蛋白的正电性，从而使其与DNA结合变疏松，使染色质结构发生变化。表观遗传学——microRNA细胞核内转录后长片段的miRNA（Pri-miRNA)Drosha酶处理70－100个nt的发夹结构的RNA（pre-miRNA）运输到
