临床标本的微生物检验（二）

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1、临床标本的微生物检验（二）程曦检验医学院复习提问1.试述血液标本的细菌学检验2.脑脊液的检验包括哪些方面主要内容1.呼吸系统感染的微生物学检验2.消化系统感染的微生物学检验3.泌尿系统感染的微生物学检验要求1.痰液标本采集和验收、检验程序、检验方法（标本的直接涂片检查、分离培养与鉴定）。2.粪便标本的检验程序、检验方法（标本的分离培养与鉴定）。3.尿液标本的检验程序、检验方法(计数)。第一部分呼吸系统感染的微生物学检验概述按解剖结构通常将呼吸道分为上呼吸道和下呼吸道。上呼吸道包括喉及喉以上呼吸道；下呼

2、吸道包括气管、支气管和肺泡。上呼吸道感染细菌学检验上呼吸道正常菌群种类链球菌棒状杆菌微球菌拟杆菌奈瑟菌梭杆菌嗜血杆菌厌氧球菌凝固酶阴性葡萄球菌上呼吸道感染的常见病原菌种类革兰染色阳性革兰染色阴性球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓链球菌、肺炎链球菌脑膜炎奈瑟菌杆菌结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、厌氧菌、麻风分枝杆菌、炭疽芽胞杆菌肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、拟杆菌、流感嗜血杆菌、不动杆菌、肠杆菌、军团菌、百日咳鲍特菌、铜绿假单胞菌真菌及其它假丝酵母菌、奋森螺旋体、放线菌、梭形杆菌肺炎衣原体微生物学检查鼻

3、咽拭子标本的采集鼻咽拭子：用无菌棉拭子直接擦拭咽后壁、扁桃体或假膜边缘处。口腔内溃疡用无菌棉拭子直接在溃疡处采集标本。用无菌棉拭子插入鼻孔约2.5cm，接触鼻粘膜采集鼻拭子。注意：立即送检，防干涸，注意无菌操作，减少杂菌污染。直接显微镜检查将脓性物或分泌物标本直接涂于两张洁净的玻片上，一张做革兰染色，另一张根据情况做抗酸染色等其它染色并进行镜检。咽拭、鼻咽部标本的细菌检验应结合临床才有助于临床诊断。分离培养细菌鉴定药物敏感性试验微生物检验注意事项1.病原体检测只对某些疾病诊断具有意义。由于菌群复杂，正常

4、寄生菌和种类繁多，一份咽拭子分离出来的细菌不一定与疾病有关，另外由于接受药物治疗，使某些细菌受到抑制，可影响阳性检出率。因此，在分析结果时应紧密结合临床。2.鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾炎病人的临床诊断；还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的诊断有意义，应结合临床。3.上呼吸道感染多为病毒引起，常见普通感冒或流行性感冒，咽炎和扁桃腺炎等，均应结合临床进行诊断。下呼吸道感染微生物学检验下呼吸道感染常见于细菌性肺炎、支气管

5、炎、肺脓肿、肺结核、真菌、支原体肺炎及病毒性肺炎等。下呼吸道感染常见病原菌种类革兰染色阳性革兰染色阴性球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌卡他球菌、脑膜炎奈瑟菌、黄色球菌杆菌白喉棒状杆菌、类白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、炭疽芽胞杆菌流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、克雷伯杆菌、百日咳杆菌、军团菌、支原体真菌白假丝酵母菌、曲霉菌、毛霉菌下呼吸道感染常见病毒：腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、麻疹病毒等。一检验流程图自然咳痰法：以晨

6、痰为宜，咳前充分漱口，减少口腔正常菌群污染，痰置于无菌容器中送检。气管镜采集法：于病灶处用导管吸引或气管刷收集，因此法患者较痛苦，不常采用。标本采集气管穿刺法：主要用于厌氧培养的标本采集。胃内采痰法：部分结核病人，尤其是婴幼儿患者不会咳嗽，且有时把痰误咽入胃内，清晨空腹时，可采用胃内容物作结核杆菌培养。*有1/4到1/2的肺部感染病人可能发生菌血症，可同时作血培养。标本质量的估计判定是否下呼吸道痰，一般认为合格的痰标本应是含白细胞、脓细胞和支气管柱状上皮细胞较多，而受污染的痰标本则是来自颊粘膜的扁平鳞状

7、上皮细胞较多。痰标本培养前应作涂片镜检，白细胞>25个/低倍镜视野，而鳞状上皮细胞<10个/低倍视野为合格标本。直接显微镜检查将痰标本涂片后待干，固定、染色，或直接湿片镜检，对病原学早期、初步诊断有价值。支气管分泌物等要离心沉淀，以生理盐水适当稀释后,直接涂片染色镜检:1)正染色法：适用于多种标本及培养物，将标本固定于洁净玻片上直接染色。常用革兰染色，苏本索一伊红染色(HE)，乳酸酚棉蓝染色，过碘酸锡夫染色(PAS)，嗜银染色(GMS）等;2)负染色法：用真菌不着色而使背景着色,检查新型隐球菌，如用墨汁

8、负染色镜检找隐球菌。分离培养与鉴定一般要求下呼吸道感染培养的细菌浓度应≥107CFU/ml，可视为病原菌，<104CFU/ml可视为污染菌。若介于两者之间如105～106CFU/ml时，要连续分离培养两次以上，仍为105～106CFU/ml时，亦认为是病原菌。痰培养标本的前处理：一般是用无菌生理盐水将痰洗涤3次，主要是洗去痰中的常居菌，然后向痰液内加入等量的（pH7.6）1%胰酶溶液，放置37℃90min即可使痰液均质化后备用。分离培养：用