临床标本的微生物检验(一)

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1、临床标本的微生物学检验（一）程曦检验医学院复习提问血培养仪的测定原理？数码鉴定法基本原理是？主要内容血液感染的微生物学检验CNS感染的微生物学检验皮肤及软组织感染的微生物学检验要求掌握血液、脑脊液、皮肤和软组织的微生物检验程序和检验方法（血液标本的增菌培养、增菌培养液的检查、分离培养与鉴定；余2标本的直接涂片检查、分离培养与鉴定）。熟悉标本采集的注意事项。了解常见病原体及其临床意义。一.血液感染的微生物学检验菌血症败血症脓毒血症有何区别？定义菌血症：细菌由局部入血，在血中没繁殖，没产生毒素，没有全身中毒症状，血培养能找到细菌。败血症：毒性强的细菌入血，在血中大量繁殖，并产生毒素，出现严重的全

2、身中毒症状，血培养细菌阳性。脓毒血症：化脓性细菌侵入血流后，在其中大量繁殖，并通过血流扩散至宿主体的其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。正常人血液是无菌的，目前败血症一词不常用，常用菌血症和脓毒血症，脓毒血症是指全身性炎症反应。菌血症是指细菌侵入血循环，在血液中可检测到细菌，有一过性的也有持续性的。血液感染是一种危重的全身感染，提供病原学的诊断极为重要。常见血液感染病原菌种类病原菌G+球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌G+杆菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌G-球菌脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌G-杆菌大肠埃希菌、铜绿假单胞

3、苗、克雷伯杆菌、肠杆菌、变形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌真菌念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌厌氧菌脆弱类杆菌、产气荚膜梭菌实验诊断一般实验室检查：WBC增高（少数不变），出现中性粒细胞核左移或者中毒颗粒。血液C反应蛋白、前降钙素原升高。血液标本的微生物学检查：当怀疑病人有血液感染时进行标本采集。病原菌的检验程序1.标本采集2.标本直接检查(1)直接显微镜检查;(2)抗原检测;(3)核酸检测;3.分离培养与鉴定(1)培养基选择;(2)分离培养与鉴定;4.抗体检测常用ELISA、间接免疫荧光技术等方法;5.药物敏感性试验检验程序标本采集血培养的指征患者的体温、外周血白细胞

4、计数，有明显的感染症状1.发热（》38℃）或低温（《36℃）2.寒战3.白细胞增多（>10×109/L，特别有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多）4.粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1×109/L）5.血小板减少6.皮肤、粘膜出血7.昏迷8.多器官衰竭9.血压降低10.呼吸加快采血时间和次数：血标本一般应在病人发热初期或根据不同的发热情况在未用抗生素前采集作细菌培养，为提高阳性率常需连续三次采血进行血培养。采血部位及抽血量：一般抽取肘静脉血做血培养。采血量通常为培养液体积的1/10，成人一次5～10ml，儿童3～5ml，新生儿婴幼儿1～2ml。抽取的血液立即以无菌要求注入血培养瓶中，迅速送检

5、。WHO关于血培养的采血原则疾病早期采集血液标本，因为疾病处于急性期或早期阶段时血液中的细菌数量较多。发热时采集血液标本，因为高热时血液中的细菌数量较多。抗菌药物应用前采集血液标本，同时采集3份血培养的阳性率将达到99%。小孩血液中的细菌数量要比成人的多，因此，年龄越小，所需要的血液量也就相应的少。儿童采血原则儿童菌血症的血中细菌浓度为成人100-1000倍婴幼儿采血总量不可超过婴幼儿全身血量2%若幼儿血量较少可选择需氧瓶优先，因幼儿患厌氧菌血症机率较成人低WHO不同年龄段所需采血量年龄两瓶中的采血量小于2岁2ml2~5岁8ml6~10岁12ml大于10岁20ml血培养瓶采集血标本和接种时要

6、严格无菌操作，避免杂菌污染。根据菌血症和脓毒症所引起的疾病，还可采集不同部位的分泌物（痰液和脓液等）标本做涂片、染色和镜检或培养。培养基选择根据细菌种类和特殊要求增菌培养基普通培养基选择培养基特殊培养基厌氧培养严格避免将气体注入培养瓶内。增菌培养基：含有聚茴香脑磺酸钠(SPS)目前主张对病人已用过抗生素或磺胺类药物时，培养基每100ml中加入：5mg对氨基苯甲酸以对抗磺胺类作用；200u青霉素酶以对抗青霉素的作用；1g硫酸镁以对抗其它抗生素(如链、四、土、新霉素及多粘菌素等)。増菌培养基含有聚茴香脑磺酸钠(sps)抗凝剂、抑制剂、中和溶菌酶和氨基糖苷类抗生素。普通细菌培养：普通肉汤或酚红葡萄

7、糖肉汤；布鲁菌用肝浸液；甲型溶血链球菌、脑膜炎双球菌用胰胨肉汤；厌氧菌用硫乙醇酸盐肉汤；已用磺胺药物，加入对氨基苯甲酸；青霉素加入青霉素酶；其他加入硫酸镁。一般临床分离标本的运送不超过1h送交实验室；4℃保存不能超过24h；厌氧菌培养的临床标本，在厌氧的环境下，25℃，可保存20～24h；脑脊液、生殖道、眼睛、内耳标本不进行冷藏。分离培养与鉴定分离培养与鉴定增菌培养瓶中不同表现提示不同细菌生长：不同表现细菌浑