《微生物生长》PPT课件

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1、第4章微生物的生长微生物生长的概念微生物生长量的测定微生物的群体生长规律环境因素对微生物生长的影响内容提要1.微生物的生长一个微生物细胞在合适的外界环境条件下，不断地吸收营养物质，并按其自身的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量、体积、大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了

2、这一群体的生长，这可从其重量、体积、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长表现在微生物的个体生长与群体生长两个水平上。4.1微生物生长的概念2.微生物个体生长表现为个体质量和体积的增加。3.微生物群体生长以微生物细胞的数量或微生物群体细胞物质量的增加作为生长的指标。个体生长→个体繁殖→群体生长群体生长＝个体生长＋个体繁殖4.1微生物生长的概念因而要了解微生物的生长规律，就要了解微生物的个体生长和群体生长两个方面。4.1微生物生长的概念4.2微生物生长量的测定微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体生长很难

3、测定，意义也不大。通常测定微生物的生长是测群体的生长，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。4.2微生物生长量的测定方法可根据菌体细胞量、菌体体积、重量直接测定，也可以根据某种细胞物质的含量或某个代谢活动速度间接测定。微生物生长测量方法个体计数法重量法生理指标法一、测微生物总数1、计数器直接计数缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。2、电子计数器计数（略）3、染色涂片计数将已知体

4、积的待测材料均匀涂布在载玻片的已知面积内，染色后显微镜下计数。一般1cm2均匀涂片0.01ml样品。选择几个至十几个视野计数细胞数量。借助镜台测微尺测直径可计算出视野的直径：每ml总数=视野平均菌数×1cm2/视野面积×100×稀释倍数涂片染色法1视野菌液(ml)＝(0.01ml／1cm2)*视野面积(cm2)提问：数了125个小格中有90个细菌，样品中的细菌浓度是多少？(90个÷125)*400/0.1ml=2880个/ml适用范围：测定个体较大的细菌或原生动物细菌个体若太小、过多，由于每一小格中细菌

5、层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。数数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数125个小格），折算样品细菌浓度；5、比例计数法将菌液与等体积血液混合后涂片，计算细菌数与红细胞比例。根据比例来计数4、比浊法测定菌数的快速方法。菌液中细胞浓度与浑浊度成正比，因此测定悬液的光密度就可以反映细胞浓度。将未知细胞数的悬液与已知细胞数悬液相比来计数。比浊计数法浊——细菌悬浮液的浊度细菌不完全透光，一定范围内菌溶液的混浊度与菌数量成正比以生物量为指标测定微生物的生长比浊法在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度(o

6、pticaldensity,即O.D.)表示菌量。实验测量时应控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。5.比浊法（二）测定活菌数1、液体稀释培养基计数：将待测样品作连续10倍稀释，一直稀释到稀释液的少量接种到新鲜培养基中没有或极少生长。记录每个稀释度出现生长的试管数，再用最大或然率理论，查MPN（mostprobablenumber，最大可能数量）表，根据样品的稀释倍数就可计算出其中的活菌含量。无菌水稀释平板计数法—固体培养法第一步：菌样巧妙稀释得到不同稀释度（10-x）菌液菌样被无菌水不同

7、稀释倍率后平板培养图10-210-310-410-5各取1ml，均匀涂布于冷固体培养基平板上或与温热液态固体培养基混合冷却。第三步：培养稀释度过低，菌落密集无法计数可以计数，但数量过多，费时费力数量合适，统计计算，作为结果数量太少，误差因素太大，不做计数第二步：接种平板每一个细菌会生成一个菌落一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。第四步：计数细菌数量=？细菌数量=数出的菌落数/稀释度例如：10-5稀释度时菌落数为125个细菌数量=125/10-5=1.25×107个/mL平板计数法是采用最广

8、的一种活菌计数法如国标法水中细菌总数的测定。注意：作空白及取平行样（2～3组）均值减小误差平均稀释液体计数法特点：液体培养、统计学查表计数又称MPN法（或最可能数法）MostProbableNumber例如测定SRB（硫酸盐还原菌，厌氧）的数量提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧培养箱）对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征进行深层隔氧液体培养，按MPN法进行计数。332010-410