免疫毒素IL3PE38KDEL原核表达载体的构建

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文免疫毒素IL．3一PE38KDEL原核表达载体的构建摘要目的：构建人白细胞介素(IL．3)与假单胞菌外毒素片段(PE38l①EL)融合基因的原核表达载体，为进一步表达具有杀伤作用的融合蛋白奠定基础。方法：1)提取人外周血总RNA，经RT-PCR扩增出IL一3基因，并用二次PCR方法引入柔性连接肽linker片段，PCR产物插入载体PQE30中，转化克隆进行酶切鉴定及DNA测序肯定克隆结果。2)以PGEX．4T-1PE38KDEL质粒为模板，PCR扩增PE38KDEL片段，P

2、CR产物经双酶切后插入到PQE30一IL一3质粒中构建PQE30．IL．3一PE38KDEL，连接产物转化克隆经酶切鉴定及DAN测序鉴定。结果：本研究成功构建了原核表达质粒PQE30．IL．3．PE38KDEL．经酶切鉴定与预期结果吻合，核酸序列测定显示插入的IL．3基因及PE38KDEL基因与Genebank报道的序列完全一致。关键词：重组毒素，人白介素3，假单胞菌外毒素(PE38I①EL)重庆医科大学硕士研究生学位论文CoNSTRUCTIoNOFFUSIONEXPRESSl0NPLASMIDObje

3、ctive：PQE30·-IL3--PE38KDELABSTRACTtoconstructthefusiongeneofhumaninterleukin一3andtruncatedpseudomonasexotoxinA(PE38KDEL)．Methods：1)humaninterleukin3cDNAwasclonedfromperipheralbloodcellsthroughreversetranscription—polymeraschainreaction(RT-PCR)．the(Gly4Se

4、r2)2linkerwasinsertedbyPCR．theclonedgenewasinsertedintoplasmidPQE30whichwasplasmidPQE30一IL3．therecombinantplasmidswasidentifiedwithDNAsequenceandendoncleases．2)thetruncatedpseudomonasexotoxinA(PE38KDEL)genewasamplifiedbyPCRfromfusionexpressionplasmidPGEX

5、一4T-1PE38KDELandclonedintoplasmidPQE30一IL3whichwasplasmidPQE30-IL3一PE38KDEL，therecombinantplasmidsPQE30·-IL3--PE38KDELwereidentifiedwithDNAsequenceandendonucIeases．Conclusion：thefusionexpressionplasmidPQE30·-13·—PE38KDELhasbeen4重庆医科大学硕士研究生学位论文constructed

6、successfully．Keywords：recombinetoxin，interleukin3，PE38KDEL5重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写AMPBpddH20DNADNTPEBEDTALBKbODPCRRpmTⅪSCDNAEPHLAMinRNARnaseImPCRS“lPH英汉缩略语名词对照英文全称AmpicillinBasepairDoubledistillationwaterDeoxyribonucleicacidDeoxynucleosidestriphosphateEthidi

7、umbromideethylenedinitrilotetraaceticacidLuria—bertanimediumKilobaseOpticaldensityPolymerasechainreactionRevolutionperminuteTris(hydroxymethy1)aminomethaneComplementarydeoxyribonucleicacidEppendorfHourLBmediacontainingampicillinMinuteRibonucleicacidRibon

8、uclease中文全称氨苄青霉素碱基对双蒸水脱氧核糖核酸脱氧核糖核苷三磷酸溴化乙锭乙二胺四乙酸LB培养基千碱基对光密度聚合酶联反应每分钟转速三羟甲氧氨基甲烷互补DNA微量离心管小时含氨苄青霉素的LB培养液分钟核糖核酸RNA酶ReversetranscriptionpolymeraseChain逆转录聚合酶链反应reactionSecondMicroliterPowerofhydrogen秒微升酸碱度重庆医科大学硕士研究生学位论文DepcTa