《讨论第三小组》PPT课件

《《讨论第三小组》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、酶分离纯化中的注意和酶活、酶比活力、回收率测定组员：彭少杰、王大亨、方言康、姜兰PPT制作人：姜兰演讲者：方言康分离纯化注意事项测定内容酶活力酶比活力酶活回收率比例表在酶分离纯化过程中，一个非常重要的问题是保护酶的活性，不使酶在纯化的过程中失活，因此酶提取纯化应注意以下问题：1）pH值2）温度3）防止氧化4）避免重金属污染5）蛋白酶的污染6）介质的极性和离子强度选择酶最稳定的pH值，确定合适的缓冲容量的缓冲溶液一般来说0℃时酶比较稳定，一般在0～4℃时操作；但有例外，如丙酮酸羧化酶，在0℃时不稳定，而在260℃时稳定多含—SH，可加入β-巯基乙醇、半胱氨酸、谷胱甘

2、肽、二硫苏糖醇等进行保护主要注意溶液的配制，亦可加入EDTA络合去除加入蛋白酶抑制剂如PMSF（苯甲基磺酰氟）、DFP（二异丙基氟磷酸）或胰蛋白酶抑制剂加入蛋白酶抑制剂如PMSF（苯甲基磺酰氟）、DFP（二异丙基氟磷酸）或胰蛋白酶抑制剂酶活力（enzymeactivity）也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。But酶的定量并非对其蛋白质进行定量，而是对它的催化能力进行定量。So酶的定量就是测定酶的活力，也即测定酶促反应的速度。如何测定酶活力？以产物浓

3、度对反应时间作图，可得到酶促反应速度曲线0产物浓度时间为什么初速度的测定是关键？可见，反应速度只在最初一段时间内保持恒定，随着时间的延长，反应速度逐渐下降0原因底物浓度的降低、产物的增加造成的逆反应的加快；产物的抑制作用；酶本身逐渐失活产物浓度时间酶的比活力指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数比活力＝酶活力单位数（U）酶蛋白质量（mg）比活力是酶制剂纯度的常用指标——比活力越大，表示酶越纯回收率产率(回收率)=每次总活力/第一次总活力×100%纯化倍数=每次比活力/第一次比活力总蛋白质/mg总酶活力/U比酶活力/(U/mg)回收率/%纯化倍数粗酶液192.609576

4、.2049.74100.001硫酸铵分级层析31.203991.20127.9241.662.60SephadexG-75层析2.942209.60751.5623.0715.10仙人掌SOD的纯化结果Theend!