IL-4与SDF-1α协同激活ZAP-70激酶信号途径诱导Th2极化

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1、安徽医科大学硕士学位论文中英文缩略词表英文缩写中文名称APSammoniumpersulphate过硫酸胺BSAbovineserlJmalbumin牛血清白蛋白CBCOrdblood脐带血cDNAcomplementarydeoxyribonucleicacid互补脱氧核糖核酸CTcyclethreshold域值周期dNTPdeoxy-ribonucleosidetriphosphate脱氧核糖三磷酸EDTAEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸EMSAelectro

2、phoreticmobilityshiftassay凝胶电泳迁移率改变实验FITCfluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素IBimmunoblotting免疫印记IFN-vinterferon·Y干扰素吖KAimmunecomplexkinaseassay免疫复合物激酶析kDakilodalton千道尔顿MeAbmonoclonalantibody单克隆抗体mRNAmessengerribonucleicacid信使核糖核酸NFATnuclearfactorofactivated

3、Tcells活化T细胞核因子PBMCperipheralbloodmononuelearcell外周血单个核细胞PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PKCproteinkinaseC蛋白激酶CPNApeptidenucleicacid反义肽核酸PTKproteintyrosinekinase蛋白酪氨酸激酶rhlL-2Recombinanthumaninterleukin重组人自细胞介素．2室墼垦塾查竺翌主堂焦篓奎一一一一rpmRT．PCRSDF．1ⅨSDS．PAGEsrkTE

4、MEDThllTh2ZAP一70roundperminure每分钟转数ReverseTranscriptasePolymerase逆转录一多聚酶链反ChainReaction应stromalcell-derivedfactor-la基质细胞源因子一1asodlmdodecylsulfatepolyaerylamide十二烷基磺酸铺gelelectrophoresis丙烯酰胺凝胶电泳snleentyrosinekinase非受体型酪氨酸激酶N，N，N，，N，。tetramethylenediamine四甲

5、基乙二胺subsetsofT-helperlymphocytes辅助T淋巴细胞1／2‘-associatedprotein．70‘一相关蛋白一702学位论文独创性申明Y758780本人所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均以在论文中作了明确说明并表示谢意。学位论文作者签名：立彳咖1日期：加盯-f-≯7学位论文使用授权声明本人完全了解安徽医科大学有关

6、保留、使用学位论文的规定。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其他指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在锯密1

7、舌适用本规定。学位论文作者签名多pJlH期：w上-o．}7，黝篙攀络7日期：1，、r订．}．∥安徽医科大学硕士学位论文IL．4与SDF。lot协同激活ZAP．70激酶信号途径诱导Th2极化硕士研究生：王俐导师：谭锦泉中文摘要目的：通过探

8、讨IL．4和基质细胞源因子(SDF)-1∥CXCLl2协同刺激下，NaiveTh细胞Thl型、Th2型细胞因子的表达以及信号转导通路中关键分子的活化情况，判断协同刺激诱导的Th细胞极化方向，以及其信号转导通路可能的分子机制。方法：使用流式细胞术和RT-PCR检测IL一4和SDF．1u协同刺激的脐带血(cB)CD4+T细胞中Thl型／Yh2型细胞因子的mRNA和胞内蛋白两个水平的表达情况；利用免疫复合物激酶分析法和免疫印记法，检测协同诱导Th2极化过程中Syk激酶和ZAP．70激酶的磷酸化情况以及Cbl家

9、族和NFAT家族活化的情况：使用ZAP一70PNA技术阻断ZAP．70的表达，探讨ZAP．70激酶在协同刺激后Th细胞极化过程中的重要意义；使用EMSA技术进一步探讨NFAT转录因子家族成员的活化情况，明确参与细胞因子转录的关键转录因子。结果：流式检测结果：用IL一4和SDF—lcdCXCLl2刺激8天，CBCD4+T细胞(NaiveYh)转换成Th2细胞模式(90．3％lL-4阳性)；RT-PCR检测结果：新鲜分离的CBCD4+T细胞中的