HBV YMDD模序突变、凋亡抑制因子与原发性肝癌关系的初步研究

《HBV YMDD模序突变、凋亡抑制因子与原发性肝癌关系的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、HBVYMDI)模序突变、凋亡抑制因子与原发性肝癌关系的初步研究中山大学博士学位论文HBVYMDD模序突变、凋亡抑制因子与原发性肝癌关系的初步研究专业：人体解剖与组织胚胎学研究方向：基因诊断博士生：欧志英指导教师：何蕴韶教授中文摘要HBV与肝癌的关系甚为密切，近年来HBV已明确为肝肿瘤病毒，是肝癌的重要风险因子之一，但其复杂的致癌机制仍有待进一步研究。HBV多聚酶YMDD模序是HBV基因复制和转录的功能保守区，对HBV病毒颗粒的装配和致病过程具有重要作用，PORE保守区位点的突变直接影响到HBV病毒颗粒复制及致癌基因x等的表达，在HBV相关的肝癌中可能起着十分重要的作用，探讨肝

2、癌中HBV多聚酶YMDD模序变异对肝癌发生的分子病毒机制的阐明很有意义。肿瘤中特异性高表达、与肿瘤细胞增殖和有丝分裂密切相关的midkine和survivin基因与肿瘤细胞凋亡也密切相关，目前受到广泛关注。Midkine和survivin都可通过下调caspase．3达到凋亡抑制的目的。但midkine和survivin在肝癌中的表达特点及其与肝癌临床病理或肝癌生物学行为之间的关系仍不清楚，有必要进一步作系统、深入地研究。我们从RBVYMDD模序突变的角度、肿瘤中midkine、survivin、caspase一3mRNA和蛋白表达、肿瘤细胞增殖、凋亡多个角度进行分析，探讨与肝

3、癌发生相关的分子病毒机制，研究midkine、survivin和caspase．3在肝癌中的表达特点及其与肝癌临床病理或生物学特性之间的关系，探讨HCC发生的分子机制，为肝癌的防治提供更多、更好的临床和实验资料。}mVYM叩模序突变、凋亡抑制因子与原发性肝癌关系的初步研究中山大学博士学位论文1．1用改进的反向斑点杂交方法对乙型肝炎病毒基因组中YMDD模序突变进行快速、准确地分型目的：开发一个新的、能快速和准确的检测HBVYMDD模序突变的方法。方法：利用反向斑点杂交(RDB)原理，结合具有负压装置的凯普杂DNA交仪，建立流过式反向斑点杂交方法，用以检测HBVYMDD模序突变。双

4、盲实验中，100个以前通过DNA测序的样品用于评价本方法的敏感性和特异性。常规RFLP方法也用于检测该方法的正确性。结果：双盲实验结果表明，这种改进的RDB方法准确性和特异性达100％，而RFLP准确性只有83％。临床标本检测中，49例被高度怀疑为拉米夫定耐药的病人标本已成功地用本方法检测。’结论：我们建立的这种流过式反向斑点杂交方法是一种简单、快速、廉价、半自动化、准确、敏感和防污染的检测HBV基因组中拉米夫定耐药突变的方法。1．2I-IBVYMDD模序突变及其与肝癌发生的关系背景：HBV持续感染与肝细胞癌的发生存在密切联系己被公认，然而感染HBV的病人发展成为HCC的具体原

5、因并不清楚。HBV多聚酶区／逆转录酶区YMDD模序是髓v复制所必需的，但HBVYMDD模序突变与肝病临床结果之间的关系目前国内外尚无文献报道。目的：为探讨HBV多聚酶区／逆转录酶区的YMDD模序突变与肝病临床结果之间的关系，分析肝癌血清HBVYMDD模序突变规律。阐明HBVYMDD模序突变及其与肝癌的关系。方法：血清nBvDNA提取后用已建立的“流过式”反向斑点杂交方法分析了45例LC、47例CHB和60例肝癌病人血清HBVYMDD模序突变情况。统计分析CHB、LC和HCC中HBVYMDD模序突变与拉米夫定用药时间、ALT、AST等的关系。IIHBVYMDD模序突变、凋亡抑制因

6、子与原发性肝癌关系的初步研究中山大学博士学位论文结果：经统计未用药的HCC组、短期用药的LC组和长时间用药的CHB组中HBVYMI)D模序突变率分别为：1．67％(1／60)、4．44％(2／45)和63．82％(30／47)。HCC组同LC组相比，差异不显著(p=0．4)：而CHB组和HCC组或LC组相比，都存在显著差异。通过Spearman相关性分析表明，HBVYMDD模序突变与用药时间长短显著相关(p<0．01)，与HCC的发病无关。HBVYMDD模序突变与ALl、相关性不显著(p=O．126)，但与AST显著相关(p

7、YMDD突变有关的较为敏感的肝功能生化诊断和病情监测指标。AST是肝细胞损伤严重程度的指标，很好地反映了HBV引起的肝病临床结果。HBVYMDD模序突变与肝脏病理过程(慢乙肝、肝硬化、肝癌)无关，只与拉米夫定用药时间长短密切相关，结果表明HBVYMDD模序突变并不是肝癌致病的分子机制。2．1实时荧光定量RT-PCR检测midkine、survivin、caspase一3和p-actin基因表达方法的建立目的：构建包含midkine、survivin、caspase-3及[I-actin基因片