基因组DNA制备,DNA琼脂糖电泳 中山大学

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1、分子医学技能分子医学技能杨杨杨霞霞霞中山医学院生化教研室yangxia@mail.sysu.edu.cn实验一口腔粘膜细胞基因组DNADNA的制备DNA的制备DNADNA的电泳检测法DNA的电泳检测法课课基因组DNA制备原理、、、方法及操作、、、、方法及操作、方法及操作(2h)堂堂设设1％％％琼脂糖凝胶板的制备％％％％琼脂糖凝胶板的制备％琼脂糖凝胶板的制备上午计计下午基因组DNA电泳（（（约（（（（约（约约约约约约1h））））））DNA琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理琼脂糖凝胶染色及结果观察结果分析与问题讨论实验原理1、、核酸的分

2、类、核酸的分类
DNA主要存在于细胞核的染色体中。。核外也有少量。核外也有少量DNADNA，DNA，，如线粒体，如线粒体DNADNA（DNA（（mtDNA（mtDNAmtDNA），mtDNA），叶绿体DNA（（cpDNA（cpDNAcpDNA），cpDNA），质粒DNADNA。DNA。
RNA存在于细胞质中，，如，如如mRNA,如mRNA,mRNA,rRNAmRNA,rRNArRNA,rRNA,,,tRNAtRNAtRNA等tRNA等等。等。
除上述DNADNA，DNA，，RNA，RNARNA外RNA外外，外，，还有非细胞形式存

3、在的病毒和噬，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，，其或只含，其或只含DNADNA，DNA，，或只含有，或只含有RNARNA。RNA。在细胞中核酸都是以与蛋白质结合的状态存在。染色体染色质纤维核小体组蛋白DNA核酸提取的主要步骤主要包括：：破碎细胞：破碎细胞，，去除与核酸结合的，去除与核酸结合的蛋白质及多糖、、脂类等生物大分子、脂类等生物大分子，，去除其它，去除其它不需要的核酸分子、、去除盐类、去除盐类、、有机溶剂等杂、有机溶剂等杂质质，质，，纯化核酸等，纯化核酸等。人基因组人基因组DNADNA的制备的制备实验目的及意义实验目

4、的及意义1.1.从人口腔上皮细胞中提取纯的基因组从人口腔上皮细胞中提取纯的基因组DNADNA2.2.掌握基因组掌握基因组DNADNA抽提的方法抽提的方法，，理解核酸分，，，理解核酸分，理解核酸分理解核酸分离纯化的基本原理离纯化的基本原理实验材料及试剂实验材料及试剂材料材料：：人口腔上皮细胞试剂及其功能试剂及其功能：：抽提缓冲液：Tris-ClpH8.0，EDTA，NaCl，RNAaseSDS，，蛋白酶，，蛋白酶，蛋白酶K，饱和酚氯仿/异戊醇（24:1）75%及95%乙醇TE缓冲液：Tris，EDTA••基因组基因组DNADN

5、A提取原理提取原理利用基因组DNADNA较长的特性DNA较长的特性，，可以将其与细胞器或质粒等，可以将其与细胞器或质粒等小分子DNADNA分离DNA分离。。加入一定量的异丙醇或乙醇。加入一定量的异丙醇或乙醇，，基因组的大，基因组的大分子DNADNA即沉淀形成纤维状絮团漂浮其中DNA即沉淀形成纤维状絮团漂浮其中，，可用玻璃棒将其，可用玻璃棒将其取出，，而小分子，而小分子DNADNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到提取的目的。





分离纯化基因组分离纯化基因组DNADNA的方法有

6、很多种的方法有很多种：：不同生物（（植物（（植物（植物、、动物、、动物、动物、、微生物、、微生物、微生物））的基因组））的基因组）的基因组DNA的提取方法有所不同，，分离方法也有差异，，分离方法也有差异，分离方法也有差异。。但原理相似。。但原理相似。但原理相似，，都是，，都是，都是利用两种DNA的差异来分离的，，因此它们有共同的步骤，，因此它们有共同的步骤，因此它们有共同的步骤：：：：：：①裂解细胞：SDS裂解细胞，EDTA抑制核酸酶②除去蛋白质：：蛋白酶：：蛋白酶：蛋白酶KKKKKK水解蛋白质，，酚和氯仿，，酚和氯仿，酚和氯仿

7、//////异戊醇抽提、、分离蛋白质、、分离蛋白质、分离蛋白质；③析出DNA：：乙醇沉淀使：：乙醇沉淀使：乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。取材:漱口后(去食屑)，，，含生理盐水，含生理盐水10~15ml约约约2~3min(偶尔咀嚼)，，，用，用用用15ml离心管离心①①①（（（4000rpm10min）））收集细胞）收集细胞，，，弃上清，弃上清实沉淀中加入0.5ml抽提缓冲液，，，重悬沉淀，重悬沉淀，，，转移至，转移至1.5mlEP管管管（（（微量移液器的正确使用（微量移液器的正确使用）））验混匀，，，65℃℃℃温育℃温育30mi

8、n，，，间歇振荡，间歇振荡操加入等体积的饱和酚（（（注意：：：取下层的酚溶液：取下层的酚溶液），充分颠倒混匀作②②②12000rpm´´´5min，，，上层水相转移至新的，上层水相转移至新的EP管管管（（（高速离心机的使用与安全（高速离心机的使用与安全：：：管对