甘蔗离体培养的胚性细胞团诱导与分化研究

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1、甘蔗离体培养的胚性细胞团诱导与分化研究摘要本论文以桂糖2l号(G21)、桂糖28(G28)、新台糖22号限OC22)和巴西固氮甘蔗RB86．7515(B8)四个甘蔗品种的嫩叶鞘进行离体培养，研究不同激素种类及组合对甘蔗愈伤组织及胚性细胞团的诱导、继代增殖、分化、生根的效应。同时，在离体培养过程中，对甘蔗愈伤组织和胚性细胞团的显微结果进行观察比较。主要试验结果如下：1、甘蔗愈伤组织诱导试验结果：(1)甘蔗愈伤组织诱导率最佳的激素组合是：MS+2，4_D3．0mg／L+NAAO．2mg／L¨汀1．Omg／L。G21、G28、ROC22、B8的

2、愈伤组织诱导率分别达到85．22％、79．21％、83．67％、78．63％。(2)MS比WMte、N6培养基更适合甘蔗外植体愈伤组织的诱导。(3)甘蔗外植体在诱导时加入5％椰子汁能提高愈伤组织诱导率，G21、G28、RoC22和B8的愈伤组织诱导率分别为87．33％，83．08％，84．13％和82．14％。(4)添加丙氨酸能提高甘蔗外植体愈伤组织的诱导率，G，21、G亿8、ROC22和B8的诱导率分别为85．17％，82．14％，84．10％和80．79％。(5)在外植体诱导前期先暗培养后光培养能提高愈伤组织诱导率，G21、G28、R

3、OC22和B8的诱导率分别为86．95％，81．11％，83．60％和77．67％。(6)当培养温度为30℃时，四个甘蔗品种的愈伤组织诱导率均达到最高值，G21、(挖8、RoC22和B8诱导率分别为88．33％，83．33％，86．27％和81．24％。(7)与其它季节相比较，在夏季取材，四个甘蔗品种愈伤组织诱导率均表现最高，(挖1、G晓8、RoC22和B8的诱导率分别达到84．00％，76．19％，83．59％和75．45％。(8)甘蔗外植体进行低温预处理会降低愈伤组织诱导效果。(9)不同季节甘蔗各品种之间的出愈时间早晚顺序为：G21<

4、l的C22春>秋>夏。(10)使用MS+2，4一D3．0mg／L+M认0．2mj叽¨汀1．0mg／L+AC0．03g／L+PVPl．5g／L培养基及激素组合能有效的降低冬季甘蔗外植体的褐化率，G21、G28、I沁C22和B8的褐化率分别为10．11％，17．74％，14．31％和20．04％。2、甘蔗愈伤组织及胚性细胞团继代增殖的试验结果(1)四种甘蔗品种均以MS+2，4．D3．Omg／L+NAA0．2mg／L+KT0．5mg／L培养基激素组合对胚性细胞团的

5、增殖效果最好，G21、G28、ROC22和B8的胚性细胞团增殖倍数分别达到41．47倍，32．28倍，38．80倍和30．35倍。(2)胚性细胞团培养时间为15天且继代次数为第4代时，四个甘蔗品种胚性细胞团增殖倍数达到最大值。G21、G28、ROC22和B8的胚性细胞团增殖倍数分别达到46．23倍，41．22倍，44．80倍，37．33倍。(3)与其它光照培养处理相比，先暗培养再光培养处理的愈伤组织及胚性细胞团增殖倍数最高。G亿1、(趁8、RoC22和B8的愈伤组织增殖倍数分别为4．45倍，3．33倍，4．13倍和3．13倍；而胚性细胞团

6、的增殖倍数则分别达到37．45倍，30．oo倍，35．05倍和28．89倍。3、甘蔗愈伤组织及胚性细胞团的分化试验结果(1)四种甘蔗品种均以MS+NAAO．2mg／L+6一BA2．0mg／L+Ⅱ)Z0．04mg／L培养基及激素组合对愈伤组织分化的效果最好，G21、G倥8、ROC22和B8的分化率分别达到86．83％，82．44％，88．89％和80．00％。(2)胚性细胞团培养时间为15天，且继代次数为第4代时，四个甘蔗品种愈伤组织及胚性细胞团分化率均达到最大值。C挖1、G28、RoC22、B8愈伤组织的分化率分别达到88．11％，84．

7、70％，90．97％，80．15％；而胚性细胞团的分化出芽率则分别达到92．28％，89．OO％，95．72％，87．98％。4、甘蔗芽增殖试验结果培养基与激素组合：MS+NAA0．2mg／L+6-BA2．5mg／L+PP3330．5mg／L有利于甘蔗芽增殖及芽的生长。G2l、G28、RoC22、B8四个甘蔗品种的芽增殖倍数分别为5．03倍，4．35倍，5．32倍，3．78倍。5、甘蔗无菌苗生根试验结果三因素激素组合：1／2MS+NAA0．2mg／L+mA2．Omg／L+PP3331．0mg／L最有利于甘蔗无菌苗生根，四种甘蔗品种的生根率

8、均达到100％。6、甘蔗愈伤组织和胚性细胞团的显微结果分析甘蔗胚性细胞团均有细胞结构紧凑、细胞小、细胞核相对较大、染色后颜色较深的特点；而愈伤组织的细胞结构较为疏松、细胞大、细胞核相对较小、染