供者未成熟树突状细胞防治移植物抗宿主病的实验研究

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1、摘要且盟：依据GVHD发生机制构建体外DC诱导T淋巴细胞的调节模型，观察供者未成熟树突状细胞(immaturedendriticcell，imDC)刺激自体T细胞增殖的能力，探讨利用imDC防治移植物抗宿主病(GⅥ{D)临床应用的可行性。越：从健康供者外周血分离单核细胞，采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM．CSF)和白细胞介素(IL)-4联合培养5天，诱导其分化成imDC；诱导培养7天，加脂多糖(LPS)刺激18小时后，分化成熟树突状细胞(maturedendriticcell，mDC)。并通过倒置显微镜

2、和HE染色观察细胞形态，细胞滴片免疫组化检测mDC表面MHC．II类分子HLA．DR、CD86的表达情况，利用流式细胞仪检测imDC和mDC表面DC特异性分子标记CDla和成熟标记CD83的阳性表达率。采用单向MLR方法，进行供受者混合淋巴细胞培养，构建DC诱导T淋巴细胞的调节模型，将实验设为3组：对照组、imDC组和mDC组，共孵育48小时后，加入CCK．8，用酶标仪检测各组OD值，比较供者imDC和mDC刺激自体T细胞增殖的能力。箜璺：(1)培养5天后细胞呈半悬浮状生长，周边毛刺较粗短，形态不一，细胞体积较单核细

3、胞增大具有典型的imDC形态学特征，流式细胞仪检测CDIa、CD83和双抗分别表达为(67．064-0．93)％、(66．824-5．06)％和(62．34+1．94)％：培养8天后细胞呈单个悬浮状生长，胞体圆形，体积较大，细胞周边可见明显较长突起，具有典型mDC形态学特征，细胞滴片免疫组化结果显示HLA．DR、CD86阳性，流式细胞仪检测CDIa、CD83和双抗表达分别为(64．984-2．99)％、(86．444-4．10)％和(65．164-0．55)％。(2)单向MLR法混合淋巴细胞培养共孵育48小时后，加入

4、CCK．8检测OD值，imDC组与对照组比较无统计学意义(P>0．05)；mDC组与对照组、imDC组比较均有显著统计学意义(P<0．01)，对自体T细胞的刺激指数大于2．00(SI=2．22)，与2．00相比差异有统计学意义(P<0．05)。结监：形态学观察、免疫组化及流式细胞仪细胞表型检测结果提示，rhGM．CSF+IL-4联合成功诱导培养出了imDC和mDC：在单向MLR法构建的DC诱导T淋巴细胞的调节模型中CCK．8法检测结果提示imDC可以诱导自体T细胞低应答，有可能成为防治GVHD的一种方法。去叠坷：树突

5、状细胞，阻断疗法，移植物抗宿主病论文类型：A(基础研究)Abtract．O．．．．b．．．i．．e．．c．．．t．i。v．．，e．：Basedonthegeneratedmechanismforgrafi-versus-ho髓disease(GVHD)，establishingthemodulatingmodelofdendriticcellinducedlymphocytesinvitro，toobservetheabilityofimmaturedendriticcellsthatinducethestimula

6、tionofautogeneicnaiveTcellsproliferation，toinvestigatethefeasibilityofclinicalapplicationthatimmaturedenddticcellspreventandtreatGVHD．Method．s：Mononuclearceilswereisolatedfromtheperipheralbloodofthehealthydonof．Theyhavebeeninducedanddifferentiatedintoimmaturede

7、ndriticcellswithrhGM．CSFandIL．4for5days；andinducedfor7days．andthendopedLPSanddendriticcellshavebeendifferentiatedintomaturedendriticcellsforl8hours。确{en氇emorphologyofthecellswasexaminedthroughinvertedmicroscopeandhematoxylinandeosinstain．theirimmunologicalpheno

8、typeCD86andHLA．DRthatbelongtoMHC*11wereexaminedwithimmunohistochemistrystainning；CDlaandC潞3wereexaminedwithflowcytometer．According论themethodofmixediymphocytereaction(MLR)。co