玻璃化冷冻小鼠囊胚的实验研究

《玻璃化冷冻小鼠囊胚的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、jl

2、i州大学2006届硕士毕业论文玻璃化冷冻小鼠囊胚的实验研究(摘要)玻璃化冷冻小鼠囊胚的实验研究研究生方明珠导师谭丽郑州大学第二附属医院妇产科河南郑州450014摘要背景与目的在体外受精和胚胎移植(Invjtr0Fertilization—EmbryoTransfeLIvF．ET)周期中，广泛采用超排卵(superovuIation)方案，获得胚胎往往多于一次移植2～3个胚胎所需的数量，胚胎冷冻是IVF工作中不可缺少的重要组成部分。多数文献在随机的对比研究中报道，与早卵裂期胚胎相比，囊胚移植可获得较高的植入率和妊娠率。而随着

3、囊胚移植的发展，囊胚冷冻势在必行。慢速冷冻囊胚存活率低，玻璃化冷冻法是将胚胎在高浓度的冷冻保护剂溶液中做短暂处理后，在0℃以上直接投入液氮中，提高降温速度，减少了由于细胞内冰晶形成所引起的～系列物理及化学损伤，使存活率提高。绝大部分的玻璃化冷冻都使用麦管盛装胚胎，限制了降温和复温速度的提高。改善冷冻载体的结构，减小样本体积，使样本与液氮直接接触，能明显提高降温速度。提高降温速度有和于胚胎迅速通过危险温度地带减少损伤，也有利于采用较低浓度的保护剂，减少毒性和渗透损伤。国外已有囊胚冷冻保存获妊娠分娩的报道，但其冷冻方案及相关技术条件

4、不统一，尚还有很多需要探讨完善的环节，且国内报道甚少。因此探索成熟的囊胚玻璃化冷冻技术，提高玻璃化的冷冻效率是研究的热点。本试验以实验动物小鼠的囊胚为模型：(1)应用普通麦管、拉细麦管及冷冻环三种不同的冷冻载体玻璃化冷冻保存小鼠早期囊胚，比较复苏后胚胎的存活率及体外继续发育能力：(2)比较应用冷冻环玻璃化冷冻早期囊胚、囊胚、扩张囊胚的效果；(3)比较冻前人工缩小囊胚腔的方法玻璃化冷冻小鼠扩张囊胚的效果。探讨囊胚玻璃化冷冻保存的相关技术，为辅助生育技术中建立可靠的囊胚玻璃化郑州大学2006届硕士毕业论文玻璃化冷冻小鼠囊胚的实验研究

5、(摘要)冷冻保存方法奠定实验室依据。材料与方法(1)应用三种不同冷冻载体玻璃化冷冻小鼠囊胚，选用小鼠的早期囊胚，将各胚胎随机分为四组：①普通麦管组、③拉细麦管(cPs)组、⑧冷冻环组、④对照组，以5．5mol／l乙二醇+lmol／1蔗糖为主要组成的玻璃化冷冻液，分别应用普通麦管玻璃化冷冻小鼠早期囊胚129个、cPs冷冻小鼠早期囊胚118个。以15％二甲基亚砜+15％乙二醇_Fic011400(10mg／mL)+0．65mol／1蔗糖为主要组成的玻璃化冷冻液，应用冷冻环冷冻小鼠囊胚125个，以同期未冷冻早期囊胚作对照(110个)，

6、观察冷冻复苏后胚胎存活率及继续发育能力。(2)应用冷冻环玻璃化冷冻小鼠的囊胚，胚胎按发育阶段分为4组：①早期囊胚组；②囊胚组：③扩张囊胚：④对照组。应用冷冻环以15％二甲基亚砜+15％乙二醇+Fic011400(10mg／mL)+O．65mol／1蔗糖为主要组成的玻璃化冷冻液，冷冻小鼠早期囊胚112个、囊胚120个、扩张囊胚105个，以同期未冷冻囊胚作对照(100个)，观察冷冻复苏后胚胎存活率及继续发育能力。(3)人工皱缩后玻璃化冷冻小鼠扩张囊胚，选用小鼠扩张囊胚，将其随机分为：①人工皱缩组、②未皱缩组、③对照组(同期新鲜未冷冻

7、的扩张囊胚)。应用冷冻环以15％二甲基亚砜+15％乙二醇+Ficoll400(10mg／mL)+0．65mol／1蔗糖为主要组成的玻璃化冷冻液，冷冻小鼠扩张期囊胚150个，冻前先应用自制的玻璃微细管进行人工缩小小鼠囊胚腔后，再应用冷冻环玻璃化冷冻小鼠扩张期囊胚，冻融后培养3h观察胚胎存活情况，设同期培养的新鲜扩张囊胚loo个为对照，并将存活胚胎及新鲜未冻囊胚移植受体孕鼠子宫内，观察胚胎的妊娠率和产仔率。数据应用统计软件ExcEL及sPssl2．0进行处理，两组样本率之间的比较采用z2检验和Fisher’s精确概率法。检验水准n=

8、0．05。结果(1)普通麦管组、cPs组、冷冻环组复苏后胚胎丢失率分别为23．26％、19．50％和O．80％，复苏后的存活率分别为38．38％、64．2l％和64．52％，囊胚孵出率分别为44．74％、63．93％和77．5％。复苏后胚胎丢失率：冷冻环组显著低于普通麦管组和cPs组(只O．05)，普通麦管组和cPs组比较无显著差异(尸>O．05)。11郑州大学2006届硕士毕业论文玻璃化冷冻小鼠囊胚的实验研究(摘要)复苏后的存活率：冷冻环组较cPs组高但差异无显著性意义(尸>O．05)，冷冻环组和cPs组均高于普通麦管组，差异

9、有显著性意义(尺O．05)。囊胚孵出率：冷冻环组高于cPs组，二者之间有显著性差异(尺O．05)，冷冻环组与对照组(同期新鲜未冷冻的早期囊胚)比较无显著性差异(尸>O．05)。(2)小鼠早期囊胚、囊胚、扩张囊胚复苏后的存活率分别为88．4％、69．2％和55．2