念珠菌DNA的提取及DNA酶切多态性分析的研究进展

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1、维普资讯http://www.cqvip.com山东生物医学工程ShandongJournalofBiomedicalEngineering念珠菌DNA的提取及DNA酶切多态性分析的研究进展石晓红宫奇林(山东省千佛山医院，济南250014)摘要念珠菌是院内感染的重要菌之一。本文就念珠菌的DNA提取及限制性内切酶分析方法应用的研究进展及前景作一概述。关键词念珠菌限制性酶切多态性分性基因分型一中图分类号R446．1文献标识码A文章编号1006—4915(2003)01．0060．02StudyonExtraction0fDNAfromYeastFormofCandida

2、spp．andRestrictionFragmentLengthPolymorphismPatternsandGeneticAnalysisShiXiaohongGongl~lin(OianFoshanHospimlofShandongProvince，Jinan250014)AbstractEpidemiologiealstudiesrequirecharacterizationofpathogenicyeastsatandbelowthespecieslevd．Thisarticlesuna．ina—rizedthemethodsoftheextractiono

3、fDNAfromtheyeastformofcandidaspp．andrestrictionfragmentlengthpolymorphismpatternsandgeneticanalysis．KeywOrdSCandidaRestrictionfragmentlengthpDly1n0rphismGeneclassification随着各种危重病人的不断增加以及广谱抗生重复性，并且生物学方法也不能精细分型、分辨率较素、免疫抑制剂的广泛应用和各种侵袭性手段的广低。目前已有一些分子生物学技术方法应用于真菌泛施实，真菌的感染及院内感染已占相当比例。其研究，尤其是念

4、珠菌基因分型的研究。常用的几种中念珠菌是医院真菌感染最常见的致病菌，我国真分型方法：(1)限制性内切酶多态型分析_3；(2)脉菌感染率占15．2％，其中念珠菌占89．2％。在院内冲场电泳核型分析【；(3)基因探针杂交分析【5；感染占8．7％，美国为10．6％【。静脉插管超过(4)随机引物扩增PCR多态性分析_5J。分子生物学48h者真菌性败血症的发病率为1％，烧伤患者，用技术方法与生物学方法相比具有良好的稳定性、重硅胶管静脉插管，5天后拔管时，其末端培养有白复性和高灵敏度，是一种具有发展前途的分型方法。念，癌症患者真菌血症死亡率占25％-40％。DNA酶切多态性分析

5、，通过一种或多种限制性内切对念珠菌感染有效的治疗和预防，一个重要的酶对所提取的DNA进行酶切，根据不同菌种其酶问题是如何确定感染源和传播途径。这就要求我们切的DNA指纹图谱不同，从本质上区别种间及种对微生物的分类不仅限于种间水平，必须深入到种内差别。现将有关内容进行综述如下。内及亚种，以便更精确了其流行病学意义。以往真1念珠菌破壁后DNA的提取菌的分型方法主要依赖于标准生化实验、血清型、酵母杀菌系统、抗性谱_2J等生物学方法。但这些方法真菌由于细胞壁厚、且具有几丁质、较坚韧、具易受环境及人为因素的影响而缺乏满意的稳定性和屏障作用。DNA的提取较一般的细胞裂解增加了作

6、者简介：石晓~Ii(1973年一)女，主管检验师。维普资讯http://www.cqvip.com第1期石晓红等．念珠菌DNA的提取及DNA酶切多态性分析的研究进展61一个破壁过程。用蜗牛酶对细胞进行前处理]。EB染色强烈表明此片断有大量拷贝数，提示这些片蜗牛酶是一种混合酶，含有纤维素酶、果胶酶、几丁断有可能作为白念的特异片段而制备成基因控针，质酶，裂解消化真菌细胞壁，从而释放出原生质体、因此DNA酶切电泳分析又常作为特异性基因片断线粒体(80％～9O％、4O％)。由于不同真菌细胞壁筛选的一种手段。Scherer通过多个单个菌株的几厚薄、几丁质含量等组成不同，故在一

7、定条件下蜗牛百代传代，酶切图谱不变，此方法重复性强。Zhang酶消化程度也不同。随细菌致病性的增强，抵抗酶J【10]通过对七所不同医院所分离89株热带念珠菌消化能力就越强。由于多了以上细胞壁裂解过RFLP分析，认为念珠菌内源性感染的可能性大。程，容易造成DNA分子的降解。小分子片断的形提出了预防用抗真菌药、减少定植是控制念珠菌内成严重影响酶切成功。而RFLP需提取大量完整的源性院内感染的合理措施的观点。Clemons[u]等对DNA，电泳带型易受DNA提取过程、电泳条件的影临床致病菌及非临床的念珠菌分离株表型和毒力的响l7J。因此通过实验寻找合适的培养及各操作条