HMMEPDT联合舒林酸对鼻咽癌细胞的杀伤作用的研究

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1、翰中．：X摹嗍E-PDT光动力疗法联名—昏林酸对鼻咽癌细胞的杀伤作用的研究HMME-PDT联合舒林酸对鼻咽癌细胞的杀伤作用的研究学科专业：细胞生物学硕士生：夏秀文导师：刘建中副教授中文摘要恶性肿瘤仍然严重威胁着人们的生命健康。常见治疗恶性肿瘤的方法有外科手术，放疗和化疗等，但是由于放、化疗具有严重的副作用，治疗方法仍需极大的改进。目前的研究中往往尝试联合几种治疗方法的联合模式来增强疗效、降低用药量，减少毒副作用。光动力疗法(phomdynamictherapy，PDT)是一种新兴的肿瘤治疗方法，包括光敏剂、光及氧分子三个要素。光敏剂分子接受特定波长的光能后通过光化学反应和能量传递过程将光能

2、转化为分子内能，在有氧条件下，产生多种活性氧物质(reactiveoxygenspecies，ROS)，破坏细胞的结构，使其功能受损，导致细胞凋亡或坏死从而达到治疗作用。光敏剂选择性定位于病变靶组织，所以PDT杀伤肿瘤细胞具有相对特异性，并且对正常组织损害小等优点。但PDT是一种局部疗法，治疗效果受光波穿透深度和光敏剂种类的影响。因此，临床上常采用PDT与其它肿瘤治疗方法联合作用，以提高PDT疗效，其中研究较多的是PDT联合化疗对肿瘤的抑制作用。但联合作用所用的化疗药物仍是传统的毒副作用很大的化疗药。舒林酸属于非甾体抗炎药(nonsteroidalanti．inflammatorydrug

3、s，NSAIDs)，是临床上常用的抗炎镇痛药，广泛用于抗炎、解热、镇痛和抗血小板聚集，并且具有抗肿瘤作用。大量的细胞实验和动物实验都证明舒林酸能够抑制多种肿瘤细胞的生长，但多数研究集中于消化道肿瘤，其抗瘤谱仍有广阔的研究前景。舒林酸联合其它疗法治疗肿瘤越来越受到关注。而有关舒林酸单独或是舒林酸与PDT联合治疗鼻咽癌肿瘤中j霞謦HMME—PDT冀t．动力疗法联合舒林酸对鼻咽癌细胞的杀伤作用的研究的研究，至今尚未见报道。本实验主要研究新型第二代光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)介导的PDT(HMME．PDT)联合舒林酸对人鼻咽癌细胞(cNEl和CNE2)生长的抑制作用，并初步探讨其可能的作用机制。

4、方法：实验分为空白对照组、单独舒林酸组(CNEl和CNE2均用：100、200、400、800和16009M)、单独PDT组(CNEl和CNE2均用：4I．tmoi／LHMME，0、0．125、0．25、0．375和O．5J／em2)及舒林酸联合PDT组。将CNEI和CNE2细胞分别分组处理后，MTT法检测各组作用24h后的抑制率。采用金氏公式评估联合作用对肿瘤细胞的杀伤是否具有协同效应或是相加效应，每种细胞各选出一组具有明显增强效应的联合模式用于以下实验的研究。经MTT法选出CNEl和CNE2细胞的联合模式均为：SU(400I-tM)+PDT(41xmol／LHMME+O．25J／cm2

5、)。CNEl和CNE2细胞经上述联合模式处理后观察以下指标：HE染色光镜观察、Hoechst33342染色荧光显微镜观察各组处理24h后细胞及细胞核的形态学变化；采用PI单染方法用流式细胞仪检测各组处理24h后细胞周期分布情况和各组处理24h后的细胞凋亡率；采用DCFH．DA标记细胞，流式细胞仪检测各组处理24h后细胞ROS产量。应用SPSS13．O软件进行单因素方差分析，各数据以均数4-标准差表示，P<0．05表示有统计学意义。结果：1．舒林酸对CNEI和CNE2细胞的抑制率呈剂量依赖性。100、200、400、800和16009M的舒林酸对两种细胞的抑制率分别是2．99％、7．17％、

6、21．86％、29．43％、45．14％和7．96％、8．89％、13．76％、18．28％、30．78％。由数据知，CNEl细胞比CNE2细胞对舒林酸更敏感。光敏剂浓度为49mol／L、光照射剂量分别为O．125J／em2、0．25J／c：m2和0．375J／em2时，CNEI和CNE2细胞的抑制率分别为19．3l％、32．32％、35．57％和17．87％、21．36％、28．17％，说明HMME．PDT对两种细胞的杀伤作用呈剂量依赖性，由数据可看出CNEl细胞比CNE2细胞对PDT更敏感。PDT和舒林酸联合处理两种肿瘤细胞，金氏公式分析联合效应的结果显示：II中．露哮删E—PDT光动

7、力疗法联合舒林酸对鼻咽癌细胞的杀伤作用的研究(1)对于CNEI细胞，200pM的舒林酸与光敏剂浓度为4ttmol／L、光照射剂量分别为0．125J／era2、0．25J／cm2和0．375J／cm2的PDT组联合产生协同效应。其中200pM的SU组，41且mol／LHMME+0．375J／cm2的PDT组以及两者的联合处理组的抑制率分别为4．64％、35．57％和58．02％，联合处理组与单独处理组相比，抑制率有显著差异