ISSR—PCR技术在对虾中的应用初步研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第23卷第1期海洋水产研究V0I-23．NO．12002年3月MARTNEFISHERIESRESEARCHMar．．2002文章编号：10007075(2002)Ol000104ISSR—PCR技术在对虾中的应用初步研究王伟难孔杰(巾圉水产科学研究院黄海求产研究所种质资源与媸传育种研究室，青岛26607i)摘要采用ISSR(InterSimpleSeqoeDCeRepeats)技术对中国对虾(Penaeusch~nensis)进行7PCR扩增。优化7PCR反应体系和反

2、应参数．对PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测从100条ISSR引物中筛选了40条有清晰产物的引物，每条引物检测到的位点数从1到l9不等．平均每条i：物可检测到位点数为7．7个。实验发现：中国对虾简单重复序列区主要由两碱基循环组成。通过分析ISSR～PCR技术本身的原理，探讨了该技术相对于同工酶检测和RAPD技术在遗传多样性分析中的优势所在，以及该技术用于遗传标识的确认和遗传图谱构建方面的前景。关键词ISSR—PCR中国对虾(Fe~tneropenaeaschinensis)遗传多样性中图分类号：Q78；Q95

3、9．223一63文献识别码：APreliminarystudyontheapplicationofinter—simplesequencerepeats(ISSR)一PCRtechniqueinChineseshrimp(Fenneropenaeuschinensis)wANGWei—jiK0NGJie(YellowSeaFisheriesResearchInstitu[e．Qingda。266071)ABSTRACTInter—SimpleSequenceRepeats(ISSR)wasthefirsttimeto

4、beappliedtode—tectthegeneticvariationinFenneropenaeuschinensis．ThereactionsystemforISSRwasopti—mized；denaturedpolyacrylamidegeleIectr0ph0resis(PAGE)andsilverstainingwereem—ployedinisolatingtheamplifiedfragments．40ISSRprimersscreenedfrom1O0primerscouldgeneratecl

5、earbands．Eachprimeryieldedfromlto19bandswiththeaverageof7．7bands，Theresultsdemonstratedthatthesimplesequencetandemrepeats(SFRs)weremainlycornposedofdinucleotederepeats．BasedOnitsuniqHecharacters，ISSRtechniquecandetectmoregeneticlocithanisozymeandhashigherstabil

6、itythanRAPDwhicharetWOmaintechniquesappliedtOassessthegeneticdiversityatpresent．ISSRhaspotentialnotonlyontheanalyzingthegeneticmarkersbutalsoonthegeneticmapsconstructionofYenneropenaeuschinensis．KEYWoRDSISSR—PCRFe~,lllerop日chinensisGeneticvariationISSRPCR(Inter

7、SimpleSequence~epeatsPCR)，又称简单莺复序列扩增多惫性。最早于1994年由囤家重点基酎研究发展觇刘项日r973(199D；120c：7)资助啦稿【]娟：2001l108接受日2C01l225维普资讯http://www.cqvip.com海洋求产研究第23卷ZietkiewiczE．(1994)等刨建其引物的核心包含几个喊基的简单重复序列．例如(CA)“值般为5或6，‘般不超过10．同时在j或3端有卜一3个选择性碱基或锚定碱基(主要在3端锚定．也有少5端和其他位置锚定的)，ISSRPCR就是利

8、用引物的这种特有性质对基因组DNA进行选择性PCR扩增的一种技术ISSR引物通过对基阿组DNA简单重复序列进行选择以及锚定碱基对基因组DNA的定佗．ISSRPCR叮以特异地扩增出徽卫星区域及其相邻区域的DNA序列。相对rRAPD技术，ISSRPCR有相当高程度的町重复性。其实验的稳定性比较可靠。同时．可扩增出比RAPD更多的条带．意昧可检测刘更