鲟鱼提取物抗癌活性及有效成分的初步筛选

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1、中山大学硕士学位论文鲟鱼提取物抗癌活性及有效成分的初步筛选姓名：万红平申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：何建国2003.5.16鲟鱼提取物抗癌活性及有效成分的初步筛选专业：水生生物学硕士生：万红平导师：何建国教授摘要鲟鱼组织通过水提法和醇提法获得7种组织提取物，以人肝癌细胞为靶细胞，进行体外抗肿瘤筛选试验，结果发现提取物s．1能显著抑制癌细胞生长。对s—I进行急性毒性试验，抗肿瘤动物试验，小鼠免疫功能测定试验，发现s—I能增强小鼠机体免疫功能，抑制小鼠体内癌细胞增殖。对s．1进行初步的分离纯化，从s—l中分离得到抑癌蛋白的主成分。体外抗肿瘤试验结果发现S—l对人肾癌细胞(786—

2、0)、人肝癌细胞(H2)、人胃癌细胞(BGC)、人鼻咽癌细胞(CNE01)都有显著抑制作用：半数抑制量IC50分别为1031ag／ml，110pg／ml，315pg／ml，89lug／ml。S—l对人正常肝细胞的生长也有抑制作用，Ic50为1353pg／m!，比s—l对人肝癌细胞(H2)的细胞毒性弱很多。另外，提取物s—l经过56

3、。C水浴处理后，失去对CNE01癌细胞的抑制作用。?／S．1对NIH小鼠的急性毒性试验结果表明，s—l对雌性小鼠有较强的毒性，、半数致死量LDso=37．32mg／kg；而对雄性小鼠毒性较弱，LDso=87．39mg／kg。s—l腹腔注射用药(剂量为50mg／k

4、g)对雄性NIH小鼠sl《)实体瘤有显著的抑制作用，抑制率为34．3％：对带有肝腹水瘤细胞的NIH小鼠的生存时间无显著延长作用。s一1灌胃给药对stso实体瘤以及肝腹水瘤都没有表现出显著的抑制作用。同时我们研究了水提物s．5与s一7的抗肿瘤动物试验，发现S一5高剂量组(100mg／kg)灌胃给药对NIH小鼠s㈨肉瘤有一定的抑制作用，抑制率为44．2％；s一7对s，㈣实体瘤以及艾氏腹水瘤(EAc)无显著抑制作用。进一步研究s—l对正常NIH小鼠机体免疫功能的影响，结果表明：s—I腹腔注射50mg／kg，使NIH小鼠的脾指数增高68．3％，淋巴细胞刺激指数增高41．5％，巨嗜细胞的吞噬率提高6

5、3．6％。S—l对小鼠机体菲特异性免疫功能以及特异性细胞免疫功能有增强作用。s．1成分非常复杂，采用硫酸铵分级沉淀法、DE一52离子交换层析法和SephadexG．75凝胶层析法对s．1进行初步的分离纯化。硫酸铵分级沉淀法证实了s—l中的抑癌活性物质为蛋白质，并且去除了大量的杂质，活性蛋白集中在硫酸铵25％一40％饱和度时所得的沉淀，最终获取率为13．I％。对活性蛋白进行DE一52阴离子交换层析、SephadexG．75凝胶层析和SDS—PAGE分析，活性蛋白的主成分(主峰)可能由两类亚基构成，一类分子量为67KDa左右，另一类分、7子量为27KDa左右。但主成分的抑癌活性在分离纯化过程中

6、明显削弱。∥关键词：鲟鱼提取物：癌细胞株：MTT；抗肿瘤作用：免疫功能：分离纯化EffectofSturgeonExtractsonCarcinomaandEffectiveConstituentsMajor：HydrobiologyName：Wanhong-pingSupervisor：ProfessorHejian-guoAbstractSevenextractswereobtainedfromsturgeontissuesbywater—extractingandethanol—extracting．Invitro．extractS-Ihadcytotoxicef琵cconhuman

7、carcinomacell786—0．H2、BGC，CNE01，andIC50were103pg／ml，1lOpg／ml，315pg／ml，891Pg／mlrespectively．S-1inhibitedthehumannormalcellL02tOO，IC50was1353pg／ml，muchhigherthanthatofH2cellline．S-1，treatedby56。C，wouldlosethecytotoxiceffectonCNEO!cellline．AnacutetoxicitytestindicatedthatS-1hadthestrongertoxicitytOth

8、efemaleNIHmice．Themedianlethaldose(LDso)forfemalemicewas37．32mg／kg，muchlowerthanmalemice(LDs()=87．39mg／kg)．Invivo，effectoftheextractsontumorwerestudied．WhenS一1wasinjectedintoabdominalcavityofNIHmice(i．P．)withthed