EGFR基因重组噬菌体疫苗的构建及抗肿瘤效应的初步研究

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1、郑州丈学2005华硕士学位论文EGFR基因重组噬萤体疫苗的掬建及抗辨癣效应豹狃步研究EGFR基因重组噬菌体疫茁的构建及抗舯瘸效应孵褫步研究研究生曾宪卓导舜李硗文谈立松郑州大学医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450052摘要诺的：案l备5个表达鸡源表皮生长嗣予受体(cEGFR)部分肽段的纂圆重组，r7噬楚体疫繁，梭测其粥耀按露性，并初步蹒察其诱导产生的肉源住抗蕊球抗秫在C57BL／6J纯系小鼠Lewis黔癣模型上的抗熟瘿效果。方法：需RT-PCR方法从鸡犟丸组织总RNA中觅隆出EGFR膜外区基因片段，将其瘫陵餮载体pMDl8-TVector上，并转能葳c

2、oliDIt5《感受态细魏，放阳性巍赚中提取震粒，瓣该基因片段进行测序。臻DNAStar软件对基因对廒的蛋自壤窿列进行分辑，选取亲水牲离、摭鹰l牲强魏区段，设幸}5对孳；物，将PCR扩增拍片段甄克隆到钾噬菌体上。经筛选的5个肽段分划展示予其农尧次要头骚寤(Pl鹳)上，搀建了5个cEGFR蕊戳重缢譬?噬毽体痰替。硝该藿缀曦菌体侵染其宿主菌，液体扩增并纯化出重组噬蕴体疫苗。经SDS-PAGE电泳及WesternBlot抗豫经裣灏，确认cEGF"T7PloB融合蛋臼的表达情况及其EGFR抗原性。用该重组噬蘸体疫懿经脚掌、皴下及暇下皮内莘疆颈背部皮下多点缀合免疫4w

3、龄的C57BL／6J纯系小鼠，每周1次，连续4w。兔痰3w的小鼠血渍与赢表达EGFR的A431缨腮孵弯，拣鼠荧光二抗标记，流式缁藏仅法梭涌被标记的纲稳，确认特舞性鼠抗EGFR摭体的产裳。免疫瓤簇，腿部熟撼嶷下接释缝系Lewis精癌纲藤株，建立cgTBL／6J纯系小鼠Lewis肺癌动物模型，10d最小心分离瘸体，备实验治疗维与空囊噬菌体对照缀瘤体均重两两玩较采雨f检验，观察各实验治疗缀的抗胂癌效果。帮矧失掌2005年磷士举位遗文至GFR蘸瓣霍缝噬莛蒋疫蘩麴聿鼋建爱拭瓣瘗教或熬锯步研究结果：鸡睾丸组织总RNA的RT-PCR产物缎l％的琼脂糖凝胶电泳，确认目标条带

4、镜置正确。从转让的克隆拣中封§取阳性毙隧，经质粒提取和测序，确认成功克除了cEGFR膜矫区段基因。戳迸克隆弓l耪(Primerll、PrirnerlII、PrimerlV、PrimerV、PrimerVI)PCR扩增目标重组片段，经1．5％琼脂糖凝胶电泳，目标带位置与预期蚴合。5个cEGFR．．T7DNA缀PCR扩增，谖实亚克隆片断被成功竟黢剿霄噬菌体基因缀中，SDS-PAGE惫泳及WesternBlot撬藤性检溅确认，表达的cEGFR—T7P10B融合蛋白具材EGFR抗原能，成功构建了5个cEGFR港因重组T7聪慧搏疫营。兔疫3W豹小瓯嫩渍经荧光摭记法流式

5、细魏仪检测，确认有特异性鼠抗EGFR抗体产生。并量成功建立了C57BL／63纯系小鼠Lewis肺瘾动物模型，备实验治疗组瘸体均重统计缩果显示P．．CLl。670组、P．epl．130组、P．ep2一136组、p．cp3-145组、p吨融142缀与空自噬菌体辩照组差异性鼹著(尹

6、原始立体构泌的形成，嘲而具有更好的免疫原性。兼键词：表皮嫩长因子受体，T7噬菌体，噬菌体展示技术，噬菌体疫苗II郑州大学2005if-硕士学位论文EGFR基隧霪组啦蓥体疫茁的构建段抗肿癌效斑的翩步研究ANANTI．TUMORRESEARCHoFRECO剐[BINANTP姒GEV_ACClNEEXpRESSEDX戴NoGENlCEGFRPostGraduate：ZengXianzhuoTutor：LiXiaowenTanLisongDepartmentofCellBiologyandMedicalGenetics,MedicalCollege,Zhengzho

7、uUniversityZhengzhou450052ChinaABS薯RAC攀Objective：Toconstruct5recombinantT7phagevaccinesdisplayextracellular1-e瘿onsofchickenepidernudgrowthfactorreceptor(cEGFR)andverifytheirEGFRantigenicity．Toinvestigatetheanti-tumore商ectoftheendogenousantibodiesinducedbythesegenerecombinantphageva

8、ccinesonaC57BLl6J-LweisLun