海洋贝类中药牡蛎的化学与生物活性研究

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1、海洋贝类中药牡蛎的化学与生物活性研究学位论文完成日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：砾矽【d忙乏丕、簟谨以此论文献给尊敬的导师及所有关心、帮助我的家人和朋友!⋯⋯⋯⋯⋯杨雪独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：犏叼签字日期：洲L年l调J17f日学位论文版权

2、使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：61和啼签字日期：山l许11，月l

3、)}日导师擗、渭华弓告别醛茕、厚平]寺签字日期：VI～年11，月l牛日海洋贝类中药

4、牡蛎的化学与生物活性研究摘要牡蛎是软体动物门(Mollusca)、双壳纲(Bivalvia)动物，其贝壳作为中药牡蛎入药始见于《神农本草经》，有着上千年的药用历史。中医认为，牡蛎性凉，味咸，归肝、胆、肾经，具有重镇安神，潜阳补阴，软坚散结的功效。在临床中．牡蛎常与其它药物配伍用于失眠、头晕、肿瘤、溃疡等症的治疗，是常用的大宗海洋中药材。尽管牡蛎的药用历史悠久，临床用药经验丰富，但是未见有对其化学成分和生物活性的系统深入研究。由于贝壳的组成具有多态性，且有机质含量极低，到目前为止，人们对牡蛎壳有机质化学成分的研究有限，对其有机质的种类、组成、

5、生物活性及其作用机制仍然缺乏足够的认识。此外，牡蛎作为我国第一大养殖贝类，以其味道鲜美、营养丰富面深受消费者喜爱，但人们在食用时，大量的贝壳往往作为低值资源或垃圾丢弃，对环境也造成了不良影响。药用牡蛎的来源是多年生的牡蛎壳，作为低值资源或废弃物丢弃的1～2年生的养殖牡蛎壳是否具有药用价值，是本论文要讨论的重要问题之一。基于以上原因，本论文对中药牡蛎(为与牡蛎肉区别，下文称之为牡蛎壳)的化学成分和生物活性进行了较为系统的研究，主要研究内容如下：1．牡蛎壳化学成分的系统分析。对牡蛎壳的无机元素、氨基酸、脂肪酸、蛋白、多糖及小分子有机物等进行了分

6、析，并比较了药用牡蛎和养殖牡蛎的化学成分差异性，为中药牡蛎的质量标准控制提供了重要的理论数据。(1)采用ICP．MS法，检测到Ca以外的47种无机元素，包括Fe、Cu、Zn、Mn等10种对人体有益的必需微量元素和有害元素Pb。比较药用牡蛎和养殖牡蛎，两者无机元素种类一致，但前者无机元素总含量、除Na、Cr、Se以外其他无机元素的含量要高于后者。(2)采用氨基酸自动分析仪，发现药用牡蛎和养殖牡蛎的氨基酸总含量分别为O．013％和0．023％，两者都含有Asp、Thr、Glu、Ser、Ala、Val等16种氨基酸，包括Thr、Val、Leu等7

7、种必需氨基酸：酸性氨基酸含量高(分别占氨基酸总量的47％和50％)，含量最高的依次是Asp和Glu。(3)采用GC／MS法，从药用牡蛎中鉴定7种脂肪酸，分别为棕榈酸(34．04％)、油酸(19．92％)、硬脂酸(9．47％)、(E，E)．9，12．十八碳二烯酸、肉豆蔻酸、(z，z)一9，12一十八碳二烯酸和壬酸；从养殖牡蛎中鉴定7种脂肪酸，全部为饱和脂肪酸，分别为棕榈酸(33．09％)、硬脂酸(8．13％)、肉豆蔻酸(6。74％)、壬酸、十七烷酸、十二烷酸和癸酸。(4)采用TPTZ分光光度法，测得药用牡蛎多糖和游离糖含量分别为2．97％和2

8、．09％；PMP一柱前衍生高效液相法分析其糖类成分主要是由Man、GlcNH2、GIcUA、GalUA、GalNH2、Glc、Gal、Xyl、Arb、Fuc组成，其中以Glc、Gal、GalNH2、Man和Arb含量较高。(5)利用考马斯亮蓝法，测得水提法得到的蛋白得率为0．002％；采用透析、QFF柱层析等方法对粗蛋白进行初步的分离纯化，结合SDS．PAGE法及考马斯亮兰染色、银染，发现药用牡蛎中蛋白的分子量分布范围较广，约为14～100kD，提示蛋白组成较为复杂；紫外检测和PAS糖基染色还表明，药用牡蛎含有糖蛋白，分子量约为40kD。(

9、6)在小分子有机物方面，对12批次药用牡蛎和12批次养殖牡蛎进行了HPLC分析，建立了相应的HPLC对照指纹图谱；为比较两者化学成分的差异性，采用灵敏度更高的UPLC．MS方法进