生物转化法制备手性4氯3羟基丁酸乙酯

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1、ZhejiangUniversityofTechnologyADissertationSubmittedforMasterofEngineeringTitle：PreparationofChiral4-Chlorine--3--HydroxyEthylButyratebyBiotransformationAuthor：丛堑堑坠然堑gAdviser：OUZhiminMajor：．．．M．———i—c—r——o——b——i—a——l——a——n——d———B———i—o——chemicalPharma

2、cy———————CollegeofPharmaceuticalScience，iangUniversityofTechnology,April，2013浙江工业大学硕士毕业论文浙江工业大学学位论文原创性声明mY帆2m4吣1㈣1眦5咖3吣1删本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经加以标注引用的内容外，本论文不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得浙江工业大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献

3、的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。作者签名：触学位论文版权使用授权书日期：渊>年口g月◇日本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江工业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于l、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密口。作者签名：獬日期：跏◆年瑚◇日翩獬：一飙奶年铭

4、月今日浙江工业大学硕士毕业论文生物转化法制备手性4．氯．3．羟基丁酸乙酯摘要本文对生物法制备手性4．氯．3．羟基丁酸乙酯(CHBE)进行了详细研究。手性4．氯．3．羟基丁酸乙酯在合成医药或农用化学品中有着广泛的用途，是一种非常重要的手性药物中间体。(S)一4．氯．3一羟基丁酸乙酯是3．羟基一2．甲基戊二酰辅酶A(HMG．CoA)还原酶抑制剂的重要的手性砌块。首先，采用Rhodotorulaqlutinis2．102不对称还原COBE制备了(S)一CI-IBE，反应的最优转化条件为pH7．0，温度3

5、5oC，转化时间24h，底物浓度为209m，菌体用量为180g／L，摇床转速180rpm，抑制剂烯丙基醇的最佳添加量为3％(v／v)。在最佳转化条件下，反应转化率及(S')一4一氯一3一羟基丁酸乙酯的对映体过剩值可达到100％和98．6％。进一步进行了放大研究，取得了较好的实验结果，平均转化率为99．967％，(S)．4．氯．3．羟基丁酸乙酯的对映体相对过剩值的平均值为98．567％。其次，采用微生物催化羰基还原反应与脂肪酶拆分相耦合的方法制备了(R)．4．氯．3．羟基丁酸乙酯，对映体过剩值达到了

6、>99．9％。(R)．4．氯．3．羟基丁酸乙酯可用来合成L．肉碱及1，4．二羟嘧啶型p一阻滞剂，研究结果表明菌株Saccharomycescerevisiae2．53对其有较强的还原能力，优化得到的最佳反应条件为：底物浓度为159／L，菌体用量为180gm温度30oC，转化时间36h，pH7．0，摇床转速180rpm。实验得出在最佳条件下转化率和(R)．4．氯．3．羟基丁酸乙酯的相对过剩值为100％和86．1％。由于获得的(R)一4．氯一3．羟基丁酸乙酯的对映体过剩值没有达到理想的较高的水平，因此

7、，课题采用乙酸乙烯酯做为酰基供体兼溶剂将微生物转化后获得的对映体过剩值为86．1％的4一氯．3一羟基浙江工业大学硕士毕业论文丁酸乙酯在脂肪酶的催化作用下在无溶剂体系中进行转酯化反应，采用脂肪酶拆分法进一步拆分了对映体过剩值为86．1％的(R)．4一氯一3，羟基丁酸乙酯，筛选得到3}f酶，对拆分反应过程进行了详细的优化，得到的最佳条件为：底物浓度300mmol／L，酶量10mg，反应温度为400C，摇床速度为150rpm。获得了对映体过剩值>99．9％的(R)．4．氯．3．羟基丁酸乙酯。接下来研究了

8、脂肪酶水解对映体过剩值为86．1％的(R)．4．氯一3．羟基丁酸乙酯与丁酸酐酯化反应后的4一氯一3．(1．氧丁氧基)丁酸乙酯(简称CABB)，筛选得到2}}酶，对水解过程也进行了优化最佳优化条件为：酶量15mg，底物浓度为400mmol／L，反应温度450C，摇床转速200rpm，获得对映体过剩值>99．9％的(R)．4一氯．3．羟基丁酸乙酯。关键词：微生物转化，不对称还原，脂肪酶，手性拆分，(S)．4．氯．3．羟基丁酸乙酯，(R)一4一氯一3一羟基丁酸乙酯浙江工业大学硕士毕业论文