《显色条件的确定》PPT课件

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1、1显色反应6.3显色反应与分析条件的选择2显色剂3显色条件的确定5测定中的干扰以及消除方法4测量条件的选择1为什么显色？官能团强吸收直接测定UV-VIS官能团弱吸收衍生化反应UV-VIS显色反应通常通过显色反应生成吸光系数大的有色物质进行测定，以提高灵敏度332+桔红色510邻二氮菲有机物质无机物质1显色反应被测组分转变为有色化合物的反应2对显色反应的要求选择性好，显色条件易于控制，重现性好；灵敏度高，一般ε>104;生成的显色化合物稳定；显色化合物与显色剂的颜色差异大，显色剂在测定波长处无明显吸收,对照性好,Δmax

2、>60nm3显色反应的类型（1）氧化还原反应：如测水中的Mn2+，用过硫酸铵将Mn2+氧化为紫红色MnO4-，在波长525nm处有强吸收（2）络合反应：对无机阳离子的显色反应，如Fe2+与邻二氮菲的络合物在510nm处有强吸收42显色剂无机显色剂：有机显色剂：形成的络合物稳定、选择性好，灵敏度高等，常用5有机显色剂CH3－C－C－CH3HO－NN－OH＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOHOHON型：PARNHNHNSNS型：双硫腙，能与20多重金属离子形成有色鳌合物NN型：丁二酮肟邻二氮菲磺基水杨酸63显色条件的

3、确定——单因素试验法CRCR1）显色剂用量（λMAXCM、pH一定）作A~CR曲线，寻找适宜CR范围ACR一般选择线性范围内有最大吸光度、且显色剂用量最少的点。在测定波长一定的条件下，影响显色反应的因素有：显色剂用量、pH、温度、反应时间、干扰组分等7酸度的影响副反应M+nR=MRnOH-H+存在型体的变化RH=R-+H+12生成不同配比的络合物例，磺基水杨酸–Fe3+pH=2~3FeR紫红色pH=4~7FeR2橙色pH=8~10FeR3黄色2)显色反应酸度反应的完成程度8pH3～8为适宜的酸度范围邻二氮菲－亚铁反应完

4、全程度与pH的关系9固定CM、CR，作A~pH曲线，寻找适宜pH范围。pH1

5、2.易溶解被测物3.稳定4.在样品的吸收光谱区无明显吸收常用溶剂的光学透明区124测量条件的选择无干扰，选择max有干扰时1)测量波长的选择2)待测溶液吸光度的选择控制A=0.15~1T=70%~10%方法1、非单色光影响小2、灵敏度高A选择C选择LAmax133)参比液的选择原则：扣除比色皿、样品基体（非待测组分）和显色剂的吸收以显色反应为例进行讨论M+R=M-Rmax试样显色剂溶剂吸光物质参比液组成无吸收无吸收光学透明溶剂基体吸收无吸收吸收不加显色剂的试液无吸收吸收吸收显色剂+溶剂基体吸收吸收吸收吸收显色剂+试

6、液+待测组分的掩蔽剂若欲测M-R的吸收maxA（样）=A（待测吸光物质）+A（干扰）+A（池）A（参比）=A（干扰）+A（池）14例:邻二氮菲光度法测水中的Fe，若显色剂及其他试剂有颜色，参比溶液为不含Fe的溶剂+所有试剂。若待测样品中有干扰组分与显色剂有反应,掩蔽干扰组分，参比溶液为待测样品+所有试剂+干扰组分掩蔽剂参比溶液选择举例155测定中的干扰以及消除方法1）控制溶液pH2）加入掩蔽剂3）改变干扰离子的价态4）采用适当的光度测量条件和方法5）选择适当分离方法消除干扰161、绝对法：测定样品的吸光度，由A=εcL求

7、出c，但须知吸光系数ε、光程L2、标准对照法：在同样条件下分别测定标准溶液（浓度为已知c标）和样品溶液的吸光度，然后求出被测样品的浓度3、标准曲线法：校正4、回归分析法：在一定条件下，测定已知浓度的多个不同样品的吸光度，用最小二乘法拟合出线性方程，再测定未知样品的吸光度，利用拟合方程求出被测样品浓度5、解联立方程组：利用吸光度的加和性，求多组分的浓度6、双波长分光光度法：自学7、示差分光光度法：透光率调零和100%的方法不同用cs>cx的标准溶液调T=0%或用cs

8、分测定多组分测定171单组分的测定：标准曲线法微量铁的测定氨基酸的测定邻二氮菲法茚三酮法蛋白质的测定考马斯亮蓝法总磷的测定磷钼蓝法营养盐的测定…….18定量校正目的：建立测定的分析信号与被分析物浓度之间的关系。一般用与被分析物质相同的标准试样进行校正。①工作曲线法（外标法）：是一种最基本的方法。用分析物