总SOD活性检测试剂盒(WST

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1、总SOD活性检测试剂盒(WST-8法)产品编号产品名称包装S0101总SOD活性检测试剂盒(WST-8法)100次产品简介：碧云天的总SOD活性检测试剂盒(WST-8法)(TotalSuperoxideDismutaseAssayKitwithWST-8)是一种基于WST-8的显色反应，通过比色来检测细胞、组织或其它样品中SOD即超氧化物歧化酶活性的试剂盒。超氧化物岐化酶(SuperoxideDismutase,SOD)能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢(H2O2)和氧气(O2)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。目前有多种SOD活性测定法，其中NBT(氮蓝四唑)法由于使用方便

2、而被广泛使用。但NBT法产生的甲臜染料水溶性差，易和被还原的黄嘌呤氧化酶相互作用，抑制百分率达不到100%等，从而使检测的灵敏度和精确度受到影响；细胞色素C法也是一种常用来检测SOD活性的方法，但细胞色素C其氧化活性高，易受样品中的还原剂干扰，另外该方法需要连续测定吸光度值，对于SOD的检测灵敏度比较低，并且不太适合大批量样本的检测。目前测定SOD比较先进的方法包括WST-1法和WST-8法，其中WST-8法比WST-1法更加稳定、灵敏度更高。本试剂盒采用了目前测定SOD方法中稳定性更好、灵敏度更高的的WST-8法。WST-8法的原理参考下图，WST-8可以和黄嘌呤氧化酶催化产生的超氧化物

3、阴离子反应产生水溶性的甲臜染料(formazandye)，该反应步骤可以被SOD所抑制。通过对WST-8产物的比色分析即可计算SOD的酶活力。基于黄嘌呤氧化酶藕联反应体系和WST-8的SOD酶活力检测原理图。XO：xanthineoxidase。WST-8的反应产物是稳定的水溶性产物，可以通过单个时间点的吸光度检测来测定SOD活力，适合高通量筛选研究。同时WST-8法测定SOD酶活力时，最大抑制百分率可以接近100%，并且可以不受一些常见的干扰因素的干扰，使检测效果比其它的一些常见方法显著改善。本试剂盒的检测不受样品中过氧化氢的干扰。很多细胞和组织样品中含有内源性的过氧化氢，会干扰SOD

4、的检测。本试剂盒通过添加适量过氧化氢酶等特殊方法，能有效去除常规样品中过氧化氢的干扰。例如，对于SOD标准品的检测，标准品中添加高达0.1mM的过氧化氢时，对于检测结果仍无显著影响。本试剂盒可以检测细胞或组织匀浆液上清、全血、红细胞抽提物、血清等生物样品中的SOD活性。一个试剂盒共可以进行100次检测。包装清单：产品编号产品名称包装S0101-1SOD检测缓冲液70mlS0101-2WST-8800μlS0101-3酶溶液100μlS0101-4反应启动液(40X)60μl—说明书1份保存条件：-20℃保存，半年有效。S0101-2WST-8溶液需避光保存。注意事项：待测样品-70℃可保

5、存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。细胞或组织等样品制备时不能采用含有TritonX-100等去垢剂的溶液，否则会干扰本试剂盒的检测。抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰，例如0.1mMascorbicacid，5mMGSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色，如果设置了使用说明中的空白对照3，就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：1.样品的准备：a.细胞样品的准备：收集细胞，用4℃或冰浴预冷的PBS或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷的PBS在4℃或冰浴进行匀浆(可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器)。随

6、后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。b.组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9%NaCl，含有0.16mg/ml肝素钠)灌流清除血液后获取组织样品。取适量的组织样品，加入4℃或冰浴预冷的PBS在4℃或冰浴进行匀浆(可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器)。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。c.血浆或红细胞样品的准备：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。4℃600g离心10分钟，移取上清至另一新的1ml离心管中，适量生理盐水稀释后即可作为血浆样本进行检测。红细胞样品可以参考步骤1a细胞样品的制备方法，或其它不含TritonX-100等去垢剂的样品制备方法。d.上述样品准备完毕后可以用碧云天生产

7、的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。通常10-20微克蛋白的细胞或组织匀浆液样品其中的SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考)。每种样品准备20-100微克蛋白量通常已经足够用于后续检测。e.根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用本试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小