sod试剂盒说明说书(100孔)

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1、请在使用前仔细阅读说明书®超氧化物歧化酶（（（SOD）））检测试剂盒）检测试剂盒-WST操作说明书100孔孔孔-*本试剂盒（（（货号（货号：：：S311）））只能用于检测）只能用于检测SOD的活性，，，不能用于，不能用于检测超氧阴离子（（（O2）））本说明书提供了下列两种检测方法。方法1（（（检测（检测SOD抑制率法）：100孔可以检测18-29个样品。。。方法2（（（检测（检测SOD活性法）：100孔可以检测4-13个样品。。。两种方法的操作和实验结果准确度都有区别，请根据您的具体情况和实验准确度要求选择。如有疑问，请

2、按照说明书下方的联系方式咨询技术人员。目录一、检测机理‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥1七、工作液的制备‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2二、试剂盒内容‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥1八、操作步骤‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2三、贮藏条件‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥1
检测SOD抑制率法‥‥‥‥‥‥‥‥2四、所需设备‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥1
检测SOD活性法‥‥‥‥‥‥‥‥‥3五、注意事项‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2九、“1UnitSOD”的定义‥‥‥‥‥‥‥‥‥4六、样品制备‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2十、Mn-SOD活性的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥4
红细胞或

3、血浆‥‥‥‥‥‥2十一、干扰物质‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥4
组织‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2十二、参考文献‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥4
细胞‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2检测机理-超氧化物歧化酶（SOD）是一种重要的抗氧化酶，它可以催化超氧阴离子（O2）的歧化反应，生成过氧化氢和单质氧。目前有很多种直接或间接地测量SOD活性的方法，在这些方法中，使用硝基蓝四唑（氮蓝四唑nitrobluetetrazolium，简称NBT）的一种间接测量方法因其便捷、简单的使用方法而被广泛应用。但是，NBT法存在一些缺点，例如生成的染®料（For

4、manzandye）的水溶性较低，会和黄嘌呤氧化酶的还原型发生反应等问题。SOD检测试剂盒-WST提供了更为®简便的检测SOD的方法，它是利用同仁化学研究所研发的高度水溶性四唑盐WST-1（2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4--®二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐），能与超氧阴离子（O2）反应生成一种水溶性的染料。WST-1被超氧阴离子还原的比率与黄嘌呤氧化酶的活性线性相关，并且会被SOD所抑制（见下图，即红色区域SOD反应优先发生，SOD反应完后蓝色区域WST-1反应才能发生）。因此，SOD或者SO

5、D类似物的IC50(50%的抑制浓度)就能用比色法来测定（同仁化学研究所专利）。®WST：：：WST是日本同仁化学研究所的注册商标。。。图1.SOD活性检测机理试剂盒内容-WSTsolution1ml×1瓶-Enzymesolution20µl×1瓶-Buffersolution11ml×2瓶-Dilutionbuffer10ml×1瓶贮藏条件请在0-5℃下保存。试剂盒在0-5℃下可保存一年。在4℃下，®WST工作液可保存2个月，酶工作液可保存3周。请避光保存®WSTsolution和WST工作液。图2.WST®-1甲臜

6、的吸收光谱图所需设备在440nm处的吸光度的变化对应于超氧阴离子-酶标仪（450nm）浓度的变化，故可在440nm下通过检测吸光度计算SOD的活性。-培养箱、96孔板-2-20µl和20-200µl的可调式移液器、多通道移液器注意事项-请使用试剂盒中附带的Dilutionbuffer或生理盐水稀释样品。-Enzymesolution被分成两层，因此忽略了移液器混合的步骤会导致实验结果的不准确。-为提高实验准确性，建议每个样品进行复孔实验。-酶工作液加入后会立即有超氧化物生成，请用多通道移液器来加酶工作液以缩短时间，减少各

7、孔间误差。样品制备（（（其他样品的处理方法详见目录（其他样品的处理方法详见目录、、、网站、网站，，，或者请您以邮件，或者请您以邮件、、、电话的形式直接联系我们、电话的形式直接联系我们。）红细胞或血浆1.取2-3ml抗凝处理后的血液（如最终浓度约为10U/ml肝素钠），4℃下，600g离心10分钟。2.移去上清液作为血浆样品。3.加等量的生理盐水（相当于移去的血浆量）至沉淀中，制成悬液。取0.4ml加入到10ml的玻璃离心管中，加生理盐水至10ml，4℃下，600g离心10分钟。4.弃上清液，加入等量的生理盐水至沉淀中，制

8、成悬液。4℃下，600g离心10分钟。重复此步骤1次。5.在沉淀中加入4.0ml蒸馏水，制成悬液。加入1ml乙醇和0.6ml氯仿。6.将混合后的液体，盖紧盖子，4℃下用振荡器强烈震荡15分钟。7.在4℃下，将混合液600g，离心10分钟，随后将上层水乙醇层小心移入一支新的试管中。8.取出0.1ml的水乙醇层，加入0.