口腔上皮细胞感染白假丝酵母菌后HBD2蛋白的表达

《口腔上皮细胞感染白假丝酵母菌后HBD2蛋白的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、宁夏医科大学学报第33卷12期·1160·JournalofNingxiaMedicalUniversity2011年12月文章编号:1674－6309(2011)12－1160－04·论著·口腔上皮细胞感染白假丝酵母菌后HBD－2蛋白的表达12樊瑞斌，张虹(1．宁夏师范学院医学院口腔医学教研室，固原756000;2．大连医科大学附属第一医院口腔科，大连116011)摘要:目的检测人β防御素2(Humanbetadefensin－2，HBD－2)在口腔上皮细胞中的表达以及白假丝酵母菌对其表达的影响。方法分别以孢

2、子相、菌丝相以及灭活的白假丝酵母菌与KB细胞共同培养6、12、24h后，采用ELISA技术检测各组KB细胞培养液中HBD－2蛋白的表达情况，与对照组进行比较。结果KB细胞有HBD－2蛋白的基础表达，感染6h后，各实验组与对照组之间表达差异无统计学意义(P＞0．05);感染12h后，孢子组(93．974±6．426)、菌丝组(72．287±2．839)显著高于对照组(37．380±5．663)，P＜0．01;感染24h后，各实验组表达均高于对照组(P＜0．05)，但和12h时的表达相比，孢子组(80．851±7．

3、860)、菌丝组(63．932±8．070)出现了下降趋势(P＜0．05)。结论HBD－2在口腔上皮细胞中有基础表达，白假丝酵母菌能诱导其表达上调;白假丝酵母菌对HBD－2的诱导表达只发生在感染的特定时期内，当菌丝进一步侵袭后，HBD－2的表达会逐渐减弱。关键词:口腔上皮细胞;白假丝酵母菌;人β防御素2+中图分类号:R781．54文献标识码:A人β－防御素(Humanbetadefensins，HBDs)1材料和方法是一类富含半胱氨酸残基的、具有广谱抗菌活性的1．1菌种及菌悬液的制备白假丝酵母菌标准株小分子阳离

4、子多肽，在机体先天免疫方面具有很重ATCC11006由南京皮肤病研究所惠赠。白假丝酵［1］要的作用。目前口腔医学研究最多的母菌经沙堡氏固体培养基上转种3次后，挑取2～3［2－3］［4］HBD－1－3在牙龈上皮、唾液腺、唾液以及个菌落于沙堡氏液体培养基中，配制成菌密度约为［5］6－1龈沟液中都能检测到其表达。HBD－1和2主1×10/mL的菌悬液。37℃、150r·min摇床震－1要对抗革兰阴性菌和酵母菌，而HBD－3在很低浓荡培养48h，3000r·min离心15min，PBS洗2遍［6］度下就可以抗革兰阳性菌

5、、革兰阴性菌和真菌。后分别制成孢子相(加于不含小牛血清的RPMI［7］HBDs抗真菌的活性已经被确定，但其确切的作1640培养液中)、菌丝相(加于含小牛血清的RPMI－1用机制还不十分清楚。有文献报道在口腔假丝酵1640培养液中，37℃、150r·min继续摇床震荡培母菌病患者的唾液中HBD－1和2的水平低于健养3h)和灭活的白假丝酵母菌(120℃水中煮［8］30min)菌悬液。康个体，而在假丝酵母菌病颊黏膜上皮中，HBD－2蛋白的表达水平却比健康颊黏膜中的1．2KB细胞传代培养KB细胞来源于口咽癌患［9］者的

6、传代上皮细胞系，具有口腔黏膜上皮细胞的特高。这些报道提示HBDs可能在宿主口腔环境［10］与假丝酵母菌之间发挥着重要作用。本实验以口点，是目前国际通用的口腔上皮细胞模型之一。腔鳞癌细胞株KB细胞为研究对象，与孢子相、菌冻存的KB细胞复苏，传代培养3次，待细胞长至6丝相以及灭活的白假丝酵母菌共同作用不同时间对数生长期(细胞密度约1×10/mL)时，用于后，采用酶联免疫反应(enzyme－linkedimmunosor-实验。bentassays，ELISA)技术检测各组KB细胞HBD－1．3白假丝酵母菌与KB细胞

7、共同培养先将2蛋白的表达情况，旨在分析探讨HBD－2与白假KB细胞在24孔板中培养48h，使细胞贴壁成单丝酵母菌感染的关系。层，吸弃培养液，PBS洗3遍。实验分成3组进行，分别于培养的KB细胞中加入孢子相、菌丝相以及6灭活的白假丝酵母菌(菌细胞密度均为1×10/收稿日期:2011－05－06作者简介:樊瑞斌(1972－)，男，宁夏人，硕士，主要从事口腔内科mL)菌悬液1mL，另设阴性对照组为单独培养的学临床及基础相关性研究工作。KB细胞，37℃恒温培养箱中继续培养6、12h通信作者:张虹。E－mail:dlzh

8、anghong@sina．com和24h。12期樊瑞斌，等.口腔上皮细胞感染白假丝酵母菌后HBD－2蛋白的表达·1161·1．4ELISA法检测HBD－2分别于6、12、24h时孢子相白假丝酵母菌都能迅速诱导上调KB细胞取培养液，1000×g，离心20min后收集上清液，按HBD－2蛋白的表达(P＜0．01)。已有研究表［12］照Humanβ－defensins2ElisaKit(武汉