奶牛布鲁氏菌病病原分离及PCR快速检测方法的研究

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1、摘要为查明内蒙古地区奶牛布鲁氏菌病感染情况和流行特点，本研究对内蒙古部分地区出现较多流产、早产、死胎、胎盘滞留等疑似布鲁氏菌病患牛的奶牛养殖基地、牧场及个体养殖户的奶牛进行了布鲁氏菌病血清学检测；同时为了查明布鲁氏菌病血清学检测地区引起奶牛布鲁氏菌病的布鲁氏菌菌种及其生物型，采集流产奶牛的病料和布鲁氏菌病血清学检测阳性奶牛的牛乳进行病原分离与鉴定。实验中对不同养牛场和养牛小区个体养殖户的642头奶牛进行了布鲁氏菌病血清学检测。结果是虎红平板凝集试验(RBPT)平均阳性率为39．39％，试管凝集试验(SAT)平均阳性率为31．

2、05％，酶联免疫吸附试验(ELISA)平均阳性率为60．84％。结果表明：内蒙古地区奶牛中不仅存在布鲁氏菌病，而且疫情有回升的趋势，部分地区疫情比较活跃，个别地区出现流行蔓延的势头。对i01份布鲁氏菌病血清学检测阳性奶牛的牛，乳进行细菌分离培养，结果分离出2株牛种生物3型布鲁氏菌。为了弥补血清学和微生物学方法检测和诊断奶牛布鲁氏菌病的种种不足，本研究建立了用聚合酶链反应(PCR)快速检测奶牛布鲁氏菌病病原的方法。试验结果表明：根据编码牛种布鲁氏菌31KDa外膜蛋白基因序列设计的一对PCR引物，能成功地扩增出预期的384bp基

3、因，不仅具有较高的特异性和敏感性，而且简便快速。该奶牛布鲁氏菌病病原PCR快速检测方法的建立，对奶牛布鲁氏菌病的检疫及快速诊断具有十分重要的意义。关键词：奶牛；布鲁氏菌病：血清学检测：病原分离鉴定：PCR检测StudyofPathogenIsolationandRapidDetectionbyPolymeraseChainReaction(PCR)onCowBrucellosisAbstractInordertoascertaintheinfectedsituationsandepidemiccharactersofbruc

4、ellosisofcowsinInnerMongolia，wedidtheserologicdetectionofthecowthathadthesymptomofBrucellosis，suchasabortion，prematuredelivery,fetaldeath，placentalretention．All也osecowswereraisedindifferentscaledairy．Meanwhile．toascertainthestrainsandbiotypesofBrucella，theabortedti

5、ssuesandmilkofpositiveserologicalcowswerecollected．Inthestudy,weexaminedasmuchas642COWSthatwerebredindifferentdairyanddistrictsbymethodofserologicdetection．TheresultsindicatedthattheaveragepositiverateofRBPT(RoseBengalPlaneTest)was39．39％，SAT(StandardTubeAgglutinati

6、onTest)was31．05％andEenzymeLinkedImmnnosorbentAassay(ELISA)was60．84％．TheresultsrevealedthatnotonlytherewereBrucellosisinInnerMongolian，butalsotheepidemicsituationincreasedagain．Itwaspopularinsomedistrictsandevenitpervadedseriouslyinafewones．101positivecowsweredetect

7、edintotaland2strainsoftype3Brucellawereisolated．Formakingupthesomedeficiencesofserologicdiagnosisandmicrobiologicalexamination，theauthoralsosetupamethodtodectectBrucellosisbyPolymeraseChainReaction(PCR)．Theresultshowedthattheexpectedgenewith384bpwasamplifiedbasedon

8、theprimerwhichdesignedaccordingtothesequenceofgeneencodingtheoutermembraneprotein(31KDa)．Besidesitssimplinessandquickness，themethodalsohascharact