rmhTRAIL治疗RPMI8226荷瘤裸鼠移植瘤的合理剂量及药代动力学研究

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1、中文摘要rmhTRAIL治疗RPMI8226荷唐裸鼠移植瘤的合理剂量及药代动力学研究摘要目的：多发性骨髓瘤(Mutiplemyeloma，MM)是一种进展性的疾病，应用化学治疗取得缓解或部分缓解后，大多数会复发，且易出现对多种化疗药物耐药即多药耐药(MDR)。一旦出现MDR，即使加大药物剂量也不易使患者再次获得缓解。因此寻求治疗多发性骨髓瘤新的有效药物，延迟疾病复发时间，是目前多发性骨髓瘤研究的热点。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNFRelatedApopt-．osisInducingLigand，TRAIL)是II型膜蛋白，通过与其特异性死亡受体(DR4，DR5)结合

2、而激活凋亡信号传导途径，从而诱导肿瘤细胞凋亡，且对正常细胞影响较小。目前美国和中国都已经批准TRAIL的临床实验，但有关TRAIL对血液系统肿瘤尤其是多发性骨髓瘤的研究报道较少。本实验应用人多发性骨髓瘤RPMl8226荷唐裸鼠及昆明种小鼠研究目前新研制的重组变构人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体TRAIL(recombinantmutanthumanTRAIL，rmhTRAIL)抑制肿瘤的最佳给药剂量及药代动力学。为rmhTRAIL作为一种新型的抗肿瘤生物制剂应用于临床治疗多发性骨髓瘤提供实验依据。方法：1人多发性骨髓瘤细胞株RPMl8226培养与传代人多发性骨髓瘤细胞株R

3、PMl8226，培养于20％灭活胎牛中文摘要血清(FBS，购白Gibco公司)、100U／ml青霉素和100pg／ml硫酸链霉素的RPMll640培养液中，置370C、体积分数5％的二氧化碳的培养箱中培养，每5"--'6天传代1次，试验用对数生长期细胞，0．25％胰酶消化，制备单细胞悬液。2rmhTRAIL对荷瘤裸鼠的肿瘤杀伤作用的实验观察2．1实验动物BALB／C．nu／nu裸鼠在SPF条下饲养，高效过滤器每小时换气10～15次，相对湿度保持在46％'--'60％，每日保持10h的光照、14h无光的阴暗周期。2．2建立动物模型在超净台内将裸鼠右下肢外侧皮肤用75％酒精消

4、毒后，皮下接种0．2m18226悬液，浓度为1×107cell／只，待皮下移植瘤长至O．5cm3，随机分为I、II实验组，每组分为7小组，每小组6只。各组rmhTRAIL均按每只裸鼠每次腹腔注射0．2mlrmhTRAIL(；[[二京沙东公司)以生理盐水配制成不同浓度，依据各组不同给药天数，按实验要求注射。组别I(大剂量组)mhTI认ILA10mg／kgdl一10B30mg／kgdl-10C10mg／kgdl一5D30mg／kgdl一5E20mg／kgdl-5F50mg／kgdl，d4G生理盐水d1．10组别II(小剂量组)abrmhTRAIL20mg／kgdl，d813．

5、3mg／kgdl-3中文摘要c8mg／kgdl-5d4mg／kgdl一10e2mg／kgdl一20f2mg／kg，2／EIdl一10g生理盐水d1．202．3观察各组裸鼠成瘤率各组以接种肿瘤细胞后3周为限，裸鼠右下肢外侧皮下出现移植瘤大于0．5cm3为标准，成瘤率=成瘤只数／总只数X100％。，．2．4rmhTRAIL治疗后各组抑瘤率以试验结束或裸鼠死亡时皮下剥离移植瘤为准，按公式计算抑瘤率。抑瘤率(％)=(对照组只数一实验组荷唐数／对照组只数)×100％。2．5rmhTRAIL治疗后各实验组8226裸鼠瘤体积变化每日用游标卡尺测量瘤体长径(a)和短径(b)，按移植瘤体积

6、(V，mm3)=ab2／2计算，观察3周，绘制生长曲线。2．6mahTRAIL治疗后8226荷唐裸鼠一般情况观察观察进食、进水量，激惹、嗜睡等不良反应。3rmhTRAIL血清药代动力学3．1药物代谢动物模型昆明种小鼠18只随机分为6组，每组3只。在超净台内用75％的酒精消毒右下腹内侧皮肤，各组均按每次腹腔注射0．2ml配制成不同浓度的rmhTRAIL(批号20080301)。组别mmTRAILl20mg／kg213．3mg／kg38mg／kg44mg／kg中文摘要52mg／kg62mg&g，2／日(间隔4h)分别于注射后30min，lh，2h，4h，6h，8h和24h，从

7、小鼠眼眶静脉丛取血(每次50．150ul。第6组不取6h和8h时间点)，室温放置2h，离心3000rpm，10min，取血清测rmhTRAIL血药浓度。3．2ELISA方法测定rmhTRAIL血药浓度(1)包被：anti．humanTRAILCapturemAb，1：250稀释于包被缓冲液，100ul／孑U，37℃孵育2hr。(2)封闭：1％BSA．PBS封闭，200ul／孑L，37℃孵育1小时。(3)加样：系列稀释的CPT标准品及恰当稀释的待测品分别加样。100ul／孑L，37℃孵育1小时。(4)检测抗体(Detection