嗜碱菌AlkalimonasamylolyticaN10耐盐碱基因的克隆及功能验证

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1、中国科学院大学UniversityofChineseAcademyofSciences硕士学位论文密级喳越菌4￡纽堕丝2＆箜g坐也丝g丛!Q砬垫毯基国笪豆隆丞功自l殓适作者姓名：蘧明盔指导教师：墨延塑班珏虽主国型堂瞳毯垒翅班宜压学位类别：堡堂亟±学科专业：微生物堂培养单位：主国整堂睦微生物班宜逝2012年11月ByMingjieXianADissertationSubmittedtoUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentof

2、therequirementForthedegreeofMasterofScienceInstituteofMicrobiologyChineseAcademyofSciences11，2012致谢三年半的时光，曾经认为如此漫长，但即将要翻过日历最后一页的那一刻却不得不又一次深深的感慨，这三年半硕士研究生的生活是如此的短暂。转眼又是一年冬天，在这个萧瑟寒冷的季节，我的内心却温暖澎湃，毕业即将来临的时候，有太多的人想要挽留，有太多的感慨想要抒发，也有太多的谢谢想要表达。首先我要感谢我的导师马延和研究

3、员。马老师高瞻远瞩的战略性思维，孜孜不倦的敬业精神、深刻独特的科学见解让我钦佩之至。衷心感谢马老师对我的培养，是您开启了我通往科研之路的大门，是您带我进入科学的殿堂，引领我领略科研高峰上的盛景，也是您开启了我人生的崭新篇章，在这毕业来临的时候，请再让我对您由衷的说一声“谢谢!”。感谢薛燕芬研究员。您对科研的热爱执着无时无刻不影响着我，您对工作的兢兢业业，精益求精无时无刻不感染着我。工作里您是严师，为我们每个人的课题付出了太多的辛苦，太多的心血。生活中您更像母亲，和我们一起吃饭一起聊，一起游玩一起笑

4、，珍惜和您在一起的点点滴滴，也谢谢您为我们付出的点点滴滴。感谢陶勇老师在大肠杆菌缺陷体菌株方面所提供的帮助。感谢每天陪我一起奋斗在实验室的兄弟姐妹们：宋亚囝，饶朗，梁朝宁，赵月菊，翟磊，廖婷婷，孟莹，高成华，殷亮，柏文琴，葛德永，姜凯，叶金统，刘文侠，张周刚，常琦，马化君，于波，周成，刘伟杰，李金山，张妍，孟姗，赵洵，宋岳吴，陈露，马群。其中要特别感谢磊哥，谢谢你在实验中给予我的指导，你是我科研之路上的探路者，止因为有了你的无私帮助，我才得以轻松的避弯路，取捷径，顺利的完成课题。作为你五年的亲师妹

5、，由衷的对你说声谢谢，祝你的科研路途一帆风顺，也祝你的家庭生活幸福美满。嗜碱菌AIkalimonasamylolyticaNl0耐盐碱基因的克隆及功能验证II特别感谢我的偶像张妍姐姐，你是我三年硕士之路上的长明灯，每当我迷茫犹豫，不辨方向时，你的三言两语总能让我拨云见日，豁然开朗，谢谢你说与我的“明言，通言，恒言”，让我得以“遇事，警示，醒事”。还要感谢相见恨晚的马群，“相约不如相见，好故事无需序曲”，相信我们的，我们院的故事才刚开始。感谢我多年的闺蜜：刘平，包蕾，王萌，璐璐，孙莉，瑜凡，三年多来

6、我成长中的每份痛苦与幸福，每份欢笑和泪水，都有你们的见证和陪伴，太深的姐妹情，太重的朋友恩，无法用言语表达，就让我将千言万语汇成一句“谢谢”送给你们。最最要感谢我的家人，我的爸爸妈妈，我的哥哥嫂子，是你们给了我最多关怀最多爱，让我感受到这世界上最温暖的亲情。忘不了每次回家时桌上丰盛的菜肴，腾起的热气中隐现着你们激动的笑容；忘不了彷徨苦恼时你们陪我促膝长谈，枕边昏黄的灯照射着你们紧锁的眉头；也忘不了每次离家时被食物塞的沉甸甸的书包，妈妈眼里闪动的泪花透射着千般的不舍和万般的期望。这一幕幕场景反反复复

7、提醒我，无论我走到哪里，无论我做什么，你们永远都是我坚强的后盾。父爱如山，厚重坚毅；母爱如海，深邃宽广。在即将毕业之际，让我再一次表达我深深的感谢深深的爱，我想对你们说：“妈妈，如果有来世，我愿做你的母亲，来回报今生你对我的爱。爸爸，前世我是你的情人，今生我是你的女儿，来世，我还要与你相遇，做情人做父女我都愿意。”最后，让我再一次对所有关心我，帮助我的人道一声“谢谢”。2012．11．11北京摘要本论文主要关注嗜碱茵AlkalimonasamylolyticaN10中与盐碱相关的基因的克隆及在模式

8、生物L卜l的功能验证。具体研究如下：1．根据N10蛋白质组学研究结果，有针对性的克隆了12个可能与盐碱相关的基因，以pucl8为载体，采用快速克隆试剂盒高效构建重组载体并在大肠杆菌K12中表达。2．测定了野生菌及12株重组菌在不同盐浓度(O％，2％，4％，6％(w／v))和不同pH(8．0，8．5，9．0，9．5)下的生长情况，确定了后续实验中耐盐碱的筛选条件：NaCI浓度为6％(w／v)，pH为9．0。3．测定了野生型E．coliK12，E．coliK12的基因缺陷株及将N10各