Lyn介导烟草提取物诱导的细胞毒性

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1、MasterDissertation，YunnanUniversityCigaretteSmokeExtraction-．inducedcellularCytotoxicitymediatedbyLynLaboratoryofBiochemistry&MolecularBiologySchoolofLifeScience，YunnanUniversityKunmingP．R．ChinaWenxueWangMay．2013独创性声明本人声j咧所翟交的沦文足我个人在导师指导卜．进行的研究：l：作及墩得的研究_『J52粜。除』／文Ifl特别加以标注和致谢n勺地方外，论文11t4i包含

2、其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，划’本文

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5、版)电f杂．点社”迸行电予和『xxj络m版，并编入CNK。I系列数捌J牵，传播本学位论文的全部或部分内容，旧意按《tt，幽优秀博硕二仁学位论文全文数挠；库出版章程》规定享受棚关权益。研究生签私：——导师签彩：期摘要吸烟损害人体健康，吸烟者的肺炎、慢性组堵塞性肺病(COPD)、哮喘和肺癌的发病率明显高于不吸烟人群。烟草提取物(CigaretteSmokeExtraction，CSE)诱导上皮细胞过氧化、细胞毒性增加、凋亡和坏死。Lyn属于SrC蛋白激酶家族，作为细胞膜脂筏组成成分之一，通过磷酸化抑制性受体、蛋白酶和配体，对细胞活信号通路进行调节。Lyn参与细胞的增殖、分化、凋亡、

6、迁移和代谢活动，并调节细胞免疫。JAK2／STATl信号通路将细胞外的各种信号跨膜介导进入细胞核内，激活下游的信号通路，包括细胞免疫和新陈代谢。因此探讨Lyn和JAK2／STATl信号通路是否参与CSE诱导的细胞毒性及免疫反应，有利于收入了解CSE的致病机理。我们的研究工作发现，随着CSE浓度增加，Lyn在呼吸道上皮细胞A549和NCIH．292中的表达量和磷酸化水平升高。药物抑制Lyn的活性，降低了CSE诱导的细胞毒性：细胞内超氧化物含量降低了30％；线粒体膜电位升高了60％；细胞活性由65％升高到98％。激光共聚焦图片的结果也显示，Lyn活性抑制、siRNA干扰和负显性调控

7、(DomainNegativestrategy)使CSE诱导的细胞凋亡率降低了50％以上。实验结果显示，CSE也诱导激活了JAK2和STATl，用Lyn的抑制剂PP2和SU6656使CSE诱导的JAK和STATl的磷酸化分别降低到60％矛I35％。同时用PP2和AG490分别抑制了Lyn和JAK2的活性，发现进一步减弱了CSE诱导的呼吸道上皮细胞毒性。另外，CSE处理呼吸道上皮细胞A549和NCI．H292，引起胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达上调，TSLP在T细胞成熟过程中有重要作用，免疫共沉淀检测显示Lyn和TSLP之间有相互结合。综上所述，我们的研究发现Lyn／JA

8、K2／STATl信号通路参与CSE诱导的细胞的毒性调节及免疫反应。关键词：Lyn；烟草提取物；JAK2／STATl；呼吸道上皮细胞。IAbstractItiswellknownthatcigarettesmokeinducesaseriesoflungdiseasessuchaslunginflammation，chronicobstructivepulmonarydisease(COPD)，asthma，andparticularlyincreasedlungcancerrisks．Cigarettesmokereducesoxidation，increasedcytotox

9、icity，apoptosisandnecrosisinepithelialcells．LynbelongstoSrckinasefamily，acomponentoflipidrafts，isacriticalsignalingmediatorinvolvedincellproliferation，differentiation，apoptosis，migrationandmetabolism，throughposphorylationofinhibitoryreceptors，enzym