水稻农林8号、农林8号mcDNA文库的构建和BSL基因的筛选

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1、安徽农业大学硕士学位论文水稻农林8号、农林8号mcDNA文库的构建和BSL基因的筛选姓名：王永杰申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：杨剑波;戚少燕2003.7.1摘要水稻农林8号m是农林8号通过”c0Y射线辐射诱变获得的一个突变体。遗传分析表明：该突变性状表现为隐性单基因的遗传，在苗期能被0．05％以上的苯达松全部杀死，而其它常规品种则表现为对苯达松的抗性。而且，苯达松敏感致死基因对水稻的农艺性状和杂交优势没有不良的影响。将苯达松敏感致死基因转化到不育系或恢复系中，可以用于保证和提高水稻杂种纯度

2、，革新水稻的制种方法。将约5万粒农林8号in于种子，平均分成12等分，分别用y射线(O，200，225，250，275，300Gy六个剂量)和离子注入(O，2000，2300，2600，2900，3200六个单位剂量，每个单位剂量约2．6x10”N+／cm2)进行诱变处理，处理后的农林8号m发苗至苗二叶期，用0．05％苯达松水培筛选抗性苗，未能获得使农林8号m突变基因功能恢复抗性苗，推测该突变可能不是点突变导致的。农林8号和农林8号m种子萌发15天左右至苗二叶期。以稻苗为材料，抽提总RNAs，分离mRNA

3、s。分别构建农林8号和农林8号meDNA文库。初级文库的库容量分别为1．2×106，】．4×106。随机挑取28个噬菌斑，用kT，作引物，通过PCR检测，获得插入片断大小从400bp～3kb，平均约lkb。通过x—gal／IPTG蓝白斑鉴定，连接效率99％以上。上述所有皆符合cDNA文库建的总体要求。参照农林8号和农林8号nlRAPD分子标记的结果，设计特异引物，通过PCR获得制备探针的DNA模板。用地高辛标记模板制作探针与农林8号eDNA文库中约30万个克隆子进行Southern原位杂交。获得了一些有杂

4、交信号的噬菌斑，并对目的片断进行克隆和序列分析。关键词：农林8号和农林8号m，苯达松，苯达松敏感致死基因，回复突变，cDNA文库构建，核酸杂交。AbstractAchemicallethalricemutantNorin8mcartingthebentazonesensitivelethalgenewasinducedfromNorin8by60Cogamma—rayradiation．Theresultsindicatedthatbentazonesensitivelethalgenewascontro

5、lledbyasinglerecessivegene．TheNorin8mseedlingcanbekilledbybentazone(above0．05％)，butitsFlseedlingsaresafe．Furthermore，thegenehasnonegativeeffectsonagronomictraitsnomatterwhetheritishomozygousorheterozygous．Thetechniquesfortransferringandselectingthemarkerg

6、eneinbreedingprogramanditsapplicationensurethepurityofhybridseed．Amakingsystemofthetwo—linehybridricehadbeenputforward．About50，000Norin8mseedsweredividedinto12parts．TheNorin8mweretreatedwith0，200，225，250，275，300GyyCO”and0，2000，2300，2600，2900，3200)<2．6×101

7、3N+／cm2lawenergyionbeanimplantationrespectively．Atthe2-leafstage，allplantswerecultivedwith0．05％bentazon，thefunctionofmutantgenecan’tberecovered．TotalRNAswereextractedfromseedlingofNorin8andits”COgamma—rayirradiationmutantNorin8induring2-3leaves．Themesseng

8、erRNAwasisolatedfromthetotalRNA，theNorin8andNorin8mricecDNAlibrarieswereconstructedTheprimarylibraieshadatotalofl．2×106phagesforNorin8andatotal1．4×106phagesforNorin8m．28randomlyselectedcloneswereevaluated．Insertfrag