cAbl激酶在β2整合素介导的信号转导途径中的作用研究

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1、摘要白细胞沿着血管内皮滚动、稳定粘附和跨内皮迁移，最终到达炎症部位是一个复杂的多步骤的过程，它的精确调控与机体的宿主防御和炎症反应密切相关。有多种粘附分子参与这一事件，其中B2整合素主要介导白细胞稳定粘附于血管内皮上和跨内皮的迁移。B2整合素是一类仅表达于白细胞表面的粘附分子家族，它包括四个成员，由一个共同的B亚基分别与四种a亚基形成非共价结合的异源二聚体。在静息的白细胞中，p2整合素以一种低亲和力和非粘附的状态存在。在炎症部位产生的细胞因子和趋化因子的刺激下，p2整合素能够迅速活化与其配体结合，这个过程为整合素的“inside．out”信号。活化的整合素能产生‘'outside．in

2、'’信号来调节细胞的骨架变化以及信号转导。D2整合素的信号对于中性粒细胞的稳定粘附和伸展非常关键，大量证据表明中性粒细胞的呼吸爆发、脱颗粒、蛋白的酪氨酸磷酸化等生理事件都依赖于D2整合素介导的细胞粘附。但是，对于中性粒细胞中p2整合素是如何调控细胞粘附的机制还不十分清楚。在中性粒细胞中，粘附引起的p2整合素的交联能够活化多种非受体酪氨酸激酶，这些激酶与细胞的骨架重排、生长、存活、运动密切相关。c．Abl激酶是一种非受体酪氨酸激酶，它参与多种受体引起的信号转导，并且参与了F．肌动蛋白依赖的细胞骨架变化。我们推测，c．Abl激酶可能参与了B2整合素介导的中性粒细胞粘附。本文主要探讨了c．A

3、bl激酶在中性粒细胞的D2整合素信号转导中的功能和作用机制。我们的研究发现，在中性粒细胞中，D2整合素的交联能够增强c-Abl激酶的活性。细胞因子TNF．a能够引起细胞表面整合素表达的增加和活性的增强，但是c．Abl激酶抑制剂STl571并不影响这一变化，表明c．Abl激酶不参与TNF．Q引起的整合素inside．out活化。而c．Abl激酶的抑制能显著降低细胞的稳定粘附和伸展，当干涉胞内的c．Abl激酶表达后也有相似的作用，因此c-Abl激酶主要参与了胆整合素的outside—in信号通路。在静息的中性粒细胞中，c．Abl激酶均匀的分布在细胞质内，而p2整合素介导细胞粘附之后，c．A

4、bl激酶就募集到B2整合素富集的部位。通过蛋白质免疫沉淀和GSTpull．down等实验，我们发现在D2整合素交联的中性粒细胞中，B2整合素与c．Abl激酶存在于同一个蛋白质复合体中，但二者的结合不是直接的。talin是一类骨架蛋白，它的头部与中性粒细胞中的B2整合素的胞浆尾部直接并持续地结合。活化的c．Abl激酶通过其SH3结构域与taliIl的头部结合，进而募集到D2整合素的胞浆尾部。Vav是一类鸟苷酸交换因子，它参与了D2整合素对中性粒细胞粘附的调控。我们的实验发现，在中性粒细胞中c．Abl激酶与Vav持续结合，并且在D2整合素产生的信号通路中c．Abl激酶能够调节Vav的活性。

5、二者的作用方式是通过c．Abl激酶的SH3结构域与Vav的SH2结构域的结合。通过点突变实验，我们发现c．Abl激酶SH3结构域中的134位酪氨酸对于二者的结合很关键。l我们的结果证明了，在p2整合素介导的中性粒细胞粘附过程中，c-Abl激酶能够被p2整合素活化。talin作为持续与132整合素胞浆尾部结合的骨架蛋白，对于c—Abl激酶募集到p2整合素非常关键。活化的c-Abl激酶能够通过调节Vav的活性进而参与了对中性粒细胞的稳定粘附和伸展的调控。本论文揭示了c-Abl激酶在天然免疫过程中的新作用。关键词：细胞粘附；132整合素；c—Abl激酶；talimVavnAbstractRe

6、cruitmentofleukocytesfrombloodintotissuesplaysanimportantroleinhostdetenseandinflammation，includingtethering，rolling，adhesionandtransmigration·ThisprocessIScoIln．olledbvavarietyofadhesionmolecules，andmembersofp2integrinsubfamilyarecriticalfortheregulationofcellularadhesiveactivityinthisevent．p2i

7、ntegriasarenoncovalentlvassociatedheterodimerscomposedofacommonIB-chainandoneoffouruniqueGt．chains．D2integrinsareinlowaffinityandnonadhesivestateinrestingleukocytes，andarerapidlyactivatedtobindligandsinresponsetolocalinflamm