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1、中华医学杂志2002年9月25日第82卷第18期 NatlMedJChina,September25,2002,Vol82,No.18·1267··论著·丹酚酸B盐对转化生长因子2β1刺激肝星状细胞活化与胞内信号转导的作用刘成海 刘平 胡义扬 朱大元【摘要】 目的 探讨丹酚酸B盐(SA2B)抗肝纤维化的作用机理。方法 分离大鼠肝星状细胞(HSC),于无包被的塑料培养皿上原代培养1、4、7d,细胞分别处于静止、中间活化与完全活化3种活化状态。予以100pmol/L转化生长因子β1(TGF2β1)刺激,观察细胞α2肌动蛋白表达与胶原分泌的变3化。选择对
2、TGF2β1刺激最为敏感的中间活化状态HSC为细胞模型,[H]胸腺嘧啶掺入法观察011μmol/L～1mmol/LSA2B对该细胞增殖的作用,倒置显微镜观察药物对细胞形态的影响;Western印迹与Northern印迹等方法观察SA2B对TGF2β1刺激活化的HSC胞外基质基因与蛋白表达、α2肌动蛋白表达的影响;提取细胞质与细胞核蛋白,Western印迹方法观察SA2B对TGF2β1刺激的HSCSmad2/3蛋白表达、磷酸化与核转位的影响。结果 TGF2β1促进各活化状态HSC的胶原分泌,促进率分别为12816%、20713%与18812%,中间活
3、化状态HSC对TGF2β1的促胶原分泌最为敏感。除011mmol/L～1mmol/LSA2B引起部分细胞死亡外,011μmol/L～10μmol/LSA2B对细胞形态无影响,但可浓度依赖性3地抑制细胞增殖,细胞内[H]胸腺嘧啶掺入量分别为对照组的76%、6011%与4718%。1μmol/L～10μmol/LSA2B明显抑制TGF2β1刺激的HSC胶原分泌量(分别为对照组的6816%与5611%),抑制α2肌动蛋白与纤维蛋白酶原激活物抑制子蛋白表达,下调I型前胶原基因表达。011μmol/L～10μmol/LSA2B不同程度地抑制Smad2/3的蛋
4、白表达量,明显抑制Smad2蛋白胞内磷酸化与核转位。结论 SA2B抑制TGF2β1的HSC胞内信号转导,从而拮抗TGF2β1的促HSC活化,以上作用是SA2B抗肝纤维化的主要机理。【关键词】 肝硬化; 丹参; 受体,转化生长因子2β; 信号传递Effectsofsalvianolicacid2BonTGF2β1stimulatedhepaticstellatecellactivationanditsintracellular33signalingLIUChenghai,LIUPing,HUYiyang,ZHUDayuan1InstituteofLi
5、verDiseases,ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai200032,China【Abstract】ObjectiveToinvestigatehepaticstellatecells(HSC)responsesatdifferentdifferentiationstagesontransforminggrowthfactor2β1,andtoelucidatethemechanismsofsalvianolicacid2B(SA2B),awatersolublecomp
6、oundfromSalviamiltiorrhiza,againsthepaticfibrosis,relatingtointerferencewithTGF2β1stimulatedHSCactivationandintracellularsignaltransductionviaSmads1MethodsHSCwasisolatedfromratbyinsituperfusionofliverand812%nycondenzgradientcentrifugation,andprimarilyculturedonuncoatedplasticf
7、or1d,4dand7drespectively,whichrepresentedquiescent,intermediateandactivatedphenotypes1Thecellswerestimulatedwith100pmol/LTGF2β1,cellphenotypeswereobservedunderinvertedmicroscope,α2actinexpression3wascheckedbyWesternblot,andcollagensecretionwasmeasuredwith[H]prolineincorporatio
8、nandcollangenasedigestion,thenHSCatonedefinitedifferentiation
