多巴胺对大鼠心肌不同缺血时间再灌注热休克蛋白表达影响的实验性研究

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．论文作者签名：弛垂甘期：兰!篮§臼±旦中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权

2、的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被套阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：多巴胺对大鼠心肌不同缺血时间再灌注热休克蛋白表达影响的实验性研究前言急性缺血再灌注损伤是目前应用静脉溶栓和冠状动脉球囊扩张

3、支架手术治疗急性心肌梗死后发生的一系列病理生理过翟，是近年来国内外学者一直在探求鹪决的问题之一。大量研究表明热休克蛋白的表达在心肌缺血再灌注过程中与缺血时间存在明显的相关性，并且具有一定的保护作用，是对抗缺血再灌注损伤的重要物质。因而，如何在缺血再灌注过程中增加热休克蛋白的表达已成为国内外学者较为关注的热门问题。多巴胺作为治疗心肌梗死的常用药物已经得到广泛的应用，扩张冠状动脉，增加心输出量，对抗缺血再灌注损伤，具有一定的心肌保护作用。本实验拟探讨在缺血再灌注过程中不同缺血时间与热休克蛋白表达之间存在的相关性，

4、以及多巴胺在此过程中对热休克蛋白表达的影响。实验材料和方法1动物和材料：中国医科大学动物部提供的成年Wistar大鼠48只。盐酸多巴胺注射液(上海禾丰制药有限公司)。HSP,o抗体(小鼠单克隆IgG，购于美国SANTACRUZ公司)。2方法：20％乌拉坦腹腔注射麻醉大鼠，固定，分离颈静脉和气管，颈静脉穿刺，气管切开，播管并固定。沿左侧胸骨旁线开胸，描记肢导心电图；连接小动物呼吸机，剪开心包，将心脏挤出胸腔，在左心耳下方连同心大静脉一并结扎左冠状动脉前降支，结扎后迅速将心脏送回胸腔，闭合胸腔，根据分组在不同的时

5、间点恢复心肌血液供应，同时经颈静脉插管输液(对照组给予生理盐水，实验组给予多巴胺注射液5ug／m击．kg)再灌注5小时。灌注结束后立即取出心脏，冲净血液，剪取心肌组织作为标本，-700C冰箱保·1·存o3实验分组：将48只大鼠随机分为12组，每组4只。第一组：实验过程中不结扎冠状动脉，再灌注时给予生理盐水。第二一六组：结扎冠状动脉15分钟，30分钟，45分钟，60分钟和90分钟，再灌注给予生理盐水。第七组：实验过程中不结扎冠状动脉，再灌注时给予多巴胺注射液。第八一十二组：结扎冠状动脉15分钟，30分钟，45分

6、钟，60分钟和90分钟，再灌注给予多巴胺注射液。4Westernblot测量标本心肌组织的HSP70含量。5测量结果的灰度值。6统计分析。结果Westernblot显示缺血30分钟以内，HSP7。随时间的延长表达增加，30分钟以后随时间的延长而逐渐减少。再灌注给予多巴胺注射液组与给予生理盐水组灰度值比较(45．83±5．83vs38．67±4．68P<0．05)HsP70的表达有明显的增加。缺血0分钟时刻，给予生理盐水和给予多巴胺注射液比较(31．2士1．47vs31±1．44P>0．05)HSP70的表达没

7、有统计学差异，而其他缺血时间比较(48．8±5．79VS40．2±5．41P<0．05)HSP7D的表达明显增加，具有统计学意义。讨论缺血会对心肌细胞造成一定程度的损伤，但在一定时间内恢复血供，则这种损伤是可逆的，相反超过一定时间的缺血损伤却是不可恢复的，即心肌细胞存在最大的缺血耐受时间。本实验通过观察不同缺血时间再灌注后HS‰的表达推测心肌细胞的最大缺血耐受时间为30分钟左右。本实验研究结果发现多巴胺在心肌缺血再灌注过程中可以增加HsP70的表达，对抗缺血再灌注损伤，从另外一个途径改善心功能。一方面与缺血再

8、灌注过程中多巴胺对冠状动脉的扩张作用有关；另一方面，多巴胺可诱导心肌细胞硒％表达的增加。·2·结论心肌缺血时间与HSB。的表达具有相关性，心肌组织的最大缺血耐受时间为30分钟左右，多巴胺在心肌缺血再灌注过程中可以增加HSP70的表达。关键词缺血再灌注损伤；热休克蛋白70；多巴胺·3·InfluenceofdopamineonHeatshockprotein70(HSP70)expressionind