AGX0104抑制脂肪生成机理的研究

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1、塑型查兰!!!!兰堡主兰、业堡塞垒g塑!竺塑型堕堕兰璧竖墨堕!堕LAGX0104抑制脂肪生成机理的研究研究生左颖导师郑英郑州大学第二附属医院妇产科郑州450003中文摘要子宫内膜癌为女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，发病率占女性生殖道恶性肿瘤的第二位。近年来，子宫内膜癌的发病率呈世界性的持续上升趋势。子宫内膜癌的发病因素目前尚无确切的定论，大量的流行学调查发现子宫内膜癌的发病和一些危险因素有关，其中肥胖，即脂肪的过度堆积和糖尿病是两个较为重要的因素。探讨肥胖以及胰岛素抵抗性的机理己成为近年来研究子宫内膜癌的热点。在脂肪和胰岛素抵抗的形成过程中，有两类转录因子发挥了重要作用。一

2、类是过氧化物酶增殖激动受体(PPARs)，属于核酸激素受体超家族。另一类是CCAAT增强子结合蛋白家族(C／EBPs)，属于亮氨酸转录因子超家族。在本试验中，着重探讨了脂肪和胰岛素抵抗形成的基础原理。本课题中运用了PPART的拮抗体(AGX0104)来阻止PPARV的活性，以此来分析PPARy在脂肪形成和胰岛素抵抗形成的作用。发现：没有PPARv的活性r就没有C／EBPa的表达和脂肪颗粒的形成。提示：C／EBPct的表达依赖于PPARy的表达，PPAR7和C／EBPa是影响脂肪形成和胰岛索抵抗的重要因素。为了探讨C／EBP家族中的另一重要成员C／EBPl3在脂肪形成和胰岛

3、素抵抗中的地位，利用鼠脂肪前细胞外源性表达C／EBPp，发现常规诱导后，这种细胞可以有PPA聊的表达，并有脂肪颗粒的形成，但无C／EBPa的表达和胰岛素的敏感性。加入PPARy的受体后，C／EBPct开始表达，并表现有胰岛素的敏感性。提示：胰岛素的敏感性和C／EBPq的表达息息相关。任何可以影响C／EBP[3。C／EBP旺，PPARy的因子都可作为影响肥胖和胰岛素抵抗的因素。AGX0104可以完全阻断PPAR了的合成，继而有效的阻断脂肪郑州大学2003年硕士毕业论文AGX0104抑制脂肪生成机理的研究细胞的形成。AGX0104具有毒性低，特异性高的特点，为预防肥胖和子宫内

4、膜癌的发生提供了理论依据。如果能开发应用于临床，可为l临床防治子宫内膜癌提供一个崭新的前景。材料与方法：1．转化质粒的制备。2．质粒扩增。3．质粒转染，制备稳定表达C／EBPB的细胞系。4．脂肪前细胞向脂肪细胞分化的过程中，应用蛋白质聚丙烯胺凝胶电泳检测PPARV，C／EBPp，C／EBPcl，Adiponectin，Perilipin的表达。结果：1．在3T3．L1脂肪前细胞向成熟脂肪细胞的分化过程中，诱导后第二天，第三天，第四天分别运用PPARy拮抗体(AGX0104，10uM)检测PPARy和C／EBPa蛋白表达水平，以及Adiponectin以及perilipin

5、(成熟脂肪细胞的标志)蛋白水平的表达，发现在诱导后的第二天，可以清楚的看到PPAKY被彻底阻断。诱导后的第四天，C／EBPa的表达被部分阻断，说明C／EBPa的表达可能部分的被其他的因子所调控。也可能是时间过短。Adiponectin这一胰岛素敏感指标在短短的一天内也被完全阻断。脂肪颗粒多少标志的指标：Perilipin(特异性的在脂肪颗粒表面表达的蛋白)也在短短的24小时被完全阻断。而C／EBPB这～转录因子却没有发生任何表达水平上的改变。2．3T3一L1脂肪前细胞在诱导后第二天应用PPARY拮抗体(AGX0104)，检测PPA脚和C／EBPa蛋白表达水平，以及Adip

6、onectin蛋白水平的表达：发现PPARY和Adiponectin的表达被完全阻断，而C／EBPa的表达被部分阻断。3．C／EBPp的表达是脂肪前细胞向脂肪细胞转化的前提条件，但不足以产生PPARY受体，PPARy受体可以激活PPART的活性，从而激活C／EBPa的活性。4．外源性表达C／EBPp的SWISS细胞在开始诱导后的不同时间逐渐的降低C／EBPp的表达，发现随着C／EBP[3表达的逐渐降低，PPAR7和C／EBPa的表达也逐渐郑州大学2003年硕士毕业论文AGX0104抑制脂肪生成机理的研究降低。进一步说明是C／EBPp是影响PeARy和C[EBPa表达的关键

7、因子，存在于PPAR7和C／EBPa传导通路的上游。5．外源性的表达C／EBP])的SWISS细胞在脂肪分化的过程中，C／EBPl3首先表达后，PPA脚开始表达，说明PPARy的表达依赖于C／EBPp的表达，丽C／EBPl3的表达是PPARV的表达的先决条件。但是一旦PPA聊开始表达后，C／EBPJB的表达将不在重要，在开始诱导的第6天，C／EBPIB开始降解。结论：1．AGX0104可以阻断PPARY，Adiponectin，Perilipin，C／EBPq的表达，进而阻断3T3-L1脂肪前细胞向脂肪细胞的转化过程。2．C／