肝癌多药耐药与介入治疗临床和实验研究

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1、中国医科大学博士学位论文肝癌多药耐药与介入治疗临床和实验研究姓名：刘瑞宝申请学位级别：博士专业：影像医学与核医学指导教师：徐克2003.4.1肝癌多药耐药与介人治疗临床和实验研究中文摘疆目的探讨原发性肝癌中多药耐药基因编码的P一鼬表达对肝动脉化疗栓塞沭疗效的影响。同时探讨应用化疗药物诱导传代的VX2肿瘤建立移植佳耐药肝癌模型以及利用耐药逆转剂进行耐药逆转研究的可行性。材料与方法1。临床研究47例未经过治疗的原发性肝癌患者，依据瘸入一般状况和肝功，应用不同剂量化疗药物与碘油混合制成碘油一化疗药物乳剂经肝动脉栓塞。其中33人应用常规剂量

2、化疗药物(表阿霉素或阿霉素40mg、丝裂霉素20mg、氟尿嘧啶500mg)；14人应用半剂量化疗药物(表阿霉素或阿霉素20rag、丝裂霉紊10rag、氟尿嘧啶500rag)。介入治疗前，在透视引导下，应用18G活检穿刺针经皮、经肝穿刺活捻。10％中性禚尔马林固定活检肿癀组织，石蜡包埋，制成4p,m厚连续切片b应用JSB一1鼠抗入单克隆抗体，采用链霉亲合素一生物寨酶复合物法进行免疫组化染色，检测原发性肝癌中MDRl编码的P—gP表达。光镜下观察200个肿瘸细胞并计算阳性细胞数，平均陌性缨照数>10％为阳性。营次肝动脉化疗栓塞后2个月进

3、行甜检查，与治疗前比较，按公式(V)=1／2ab2计算肿瘤体积，按WHO推荐的实体肿瘤疗效判定掭准判定疗效，肿瘤体积缩小超过50％势有效。斌时分磐}P—gP表达以及不同化疗药物剂量对肝动脉化疗检塞术治疗疗效的影响。2。动魏实验健康日本大耳自兔35只，lO只用于肿瘤传代，25只用于建立移植往膳癌模型。携带VX2肿瘤大耳自兔2只，将其中一只麻黪，无蘑条件下取高大腿矾岗肉传代的舯癯缝织，制残瓣瘸悬液注入传代兔太腿肌肉进行常规传代。勇一只予传代后2周，连续三周，每周～次，经耳廓蕨静脉注入阿霉索注射液(4mg／Sml次)避稽闯歇髅穗药诱导。第

4、三次优疗结柬嚣一闵，取肿瘤组绥，再次传代、诧疗，共进彳亏三次传代，每次进行三凌化疗。25只健康大耳自兔隧税分为五缱，每蕴5哭，全麻下腹歪中线切口，暴瓣野脏，在肝左叶中部植入Imm3的VX2肿瘸组织，建立移植性_翳癌摸型。A、B磁组植入肿瘤组织取自常规传代兔，c、D、E三组檀入的蒡孛瘸缀织取自经过多次传代、{毛疗药物诱导的传代兔。肝黢内肿瘤植入3周后，进行增强CT检查，确定肿瘤大小。将肝癌模翟兔麻醉，无蘸条件下黢歪孛甥磊，暴露肝动脉，寓视下穿刺，分别注入不同化疗药物或生理盐承。其中，A、e两缝没入阿霉索4rag(2ml生理盐永稀释)B

5、、D两缓注入等量生理盐水，E组经肝动脉注入异搏定1mg(0．2m1)和阿簿素4rag(2ml生理盐水稀释>。治疗嚣一周再次进行增强CT梭查并与用药前跑较，分析各缰肿瘸倍增率。处死全部兔，取边缘肿瘤缀织，分别予-70℃冻存，10％牵性福尔马林、2。5％戊二醛固定。HE染色和制备毫镜标本，光镜和透射电镜(JEM一1200EX)下溉察VX2肿瘸结构。冻存肿瘤组绞制成荤细施惫液，Ⅸ染色，流式缨腮仪检测分析备组肿瘤凋亡率。3．统计学分析应用SPSSl0．0软件分析实验结果，采稍x2检验和Fisher精确概率检验法、方差分析迸行统计学处理，P<

6、O．05秀有显著意义。结果1．47例原发性肝癌病入中，34例P—gp袭达阳性，袭现为细胞貘肇珏缨胞浆均匀或散在棕色颗粒，染色阳链率为72．3％。P一印阳性表达与性别、乙型肝炎、Chdd分级、病灶数目、病灶大小、有无包膜、有无门脉栓予等晦床病理因素无关。2．应用常规剂量化疗药物与碘油桶成乳麴梭塞的33铹HCC患者中，P—gp阳饿表达率为69．7％(23／33)。P一韶阴性患者髓cE治疗有效率显著高于阳性患者(P

7、CE治疗·2·疗效无显著差异(P>o．05)；34例P—gP阳性患者中，应用不同剂量化疗药物，疗效无显著差别(P>0．05)；13例P—gP阴性患者中，应用不同剂量化疗药物，常规剂量组有效率高于半剂量组，但无显著差异(P>o．05)。3．VX2肿瘤传代兔化疗后，将肿瘤组织悬液注入兔大腿内侧肌肉再次传代，传代后瘤组织生长速度无明显变化。4．25只模型兔肝脏内肿瘤接种全部成功。三周后行增强CT检查，肿瘤元强化，边缘光整，与正常肝组织分界清楚，各组之间肿瘤大小无明显差异。经肝动脉注入阿霉素、生理盐水和阿霉素加异搏定一周后行增强CT检查，各

8、组肿瘤体积均增大。比较各组肿瘤倍增率，A组显著低于其它组(P<0．05)；C组肿瘤倍增率低于B、D两组，但各组之间无显著差异(P>0．05)；E组肿瘤倍增率低于c、D两组，但无显著差异(P>0．05)。5．形态学改变：传代后，经过耐药