合成鱼腥草素的免疫调节及佐剂作用研究

《合成鱼腥草素的免疫调节及佐剂作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、沈阳药科大学博士学位论文合成鱼腥草素的免疫调节及佐剂作用研究姓名：王大勇申请学位级别：博士专业：药理学指导教师：于庆海;锅岛俊隆2003.5.1合成鱼腥草素的免疫调节及佐3'J作用研究单位：沈阳药科大学代码：10163研究生姓名：王大勇专业：药理学学位类别：博士学位指导教师：沈阳药科大学于庆海教授日本名古屋大学医学部锅岛俊隆教授论文评阅人：就坎矿波中答辩委员会委员：学位论文完成日期：2003答辩时间：计：学位论文表格插图整年＼3月tOS贝2个23幅刍p莉粳刎锄荔选圈莼挝盔堂谴±堂焦迨塞!盒盛鱼熙

2、蔓塞鲍鱼堡遢蔓巫筐型韭旦婴基塑墨摘要本研究的目的是为了深入探讨合成鱼腥草素的免疫调节作用。在广泛查阅有关合成鱼腥草素免疫调节作用资料的基础上，本研究首先考察合成鱼腥草素对巨噬细胞功能及活化状态的影响。在获得了一些研究发现的基础上，进一步考察了合成鱼腥草素在巨噬细胞内的细胞信号传导途径，并且增加了与合成鱼腥草素的免疫佐剂作用有关的研究内容。，，为了达到最初的实验目的，第一章研究合成鱼腥草素对巨噬细胞功能和活化状态的影响。在这一章中，首先，采用溶菌法考察合成鱼腥草素对巨噬细胞分泌溶菌酶水平的影响；其

3、次，采用游离酚法研究合成鱼腥草素对巨噬细胞产生的耐酒石酸酸性磷酸酶水平的影响：第三，采用显微镜观察法考察合成鱼腥草素对巨噬细胞吞噬功能的影响；第四，采用溶血法测定合成鱼腥草素对巨噬细胞产生的补体c4水平的影响；第五，采用酵母花环法检测合成鱼腥草素对巨噬细胞表面C3b受体水平的影响；第六，采用流式细胞术法观察合成鱼腥草素对巨噬细胞呼吸爆发的影响；第七，采用ELISA法探讨合成鱼腥草素对巨噬细胞产生IL．1Ⅱ及IL．1B水平的影响。在第一章已经取得的研究结果的基础上，第二章进一步考察了合成鱼腥草素在

4、巨噬细胞内的信号传导途径。首先，采用荧光分光光度法研究合成鱼腥草素对巨噬细胞内游离钙离子浓度的影响；其次，采用Western．blotting法分析合成鱼腥草素对巨噬细胞内CaMKII、CREB和ERK112磷酸化程度以及Fos蛋白表达水平的影响。在第一章实验中发现合成鱼腥草素能够促进巨噬细胞产生IL．邛。对于T淋巴细胞激活和增殖具有重要作用的细胞因子，一种是巨噬细胞产生的T细胞协同激活因子IL-1，另一种是T淋巴细胞产生的IL-2。为了进一步探讨并验证合成鱼腥草素的免疫调节作用，在第三章实验中

5、，首先，采用MTT法测定合成鱼腥草素对脾细胞增殖的影响；其次，采用胸腺细胞增殖法检测合成鱼腥草素对脾细胞产生的IL。2水平的影响；第三，采用ELISA法测定合成鱼腥草素对纯化外周血T淋巴细胞产生IL．2水平的影响。第四章是合成鱼腥草素免疫佐剂作用研究。在这一章中，首先，采用溶血法测定合成鱼腥草素连续给药后对绵羊红细胞抗体IgGIgM产生的影响；其次，采用ELISA法分析和评价合成鱼腥草素的典型免疫佐剂作用。远塑煎魁盍堂蝗±堂焦迨塞!盒盛鱼堡蔓塞曲鱼壅翅堇丛蓬型佳旦受宜一————————J煎蔓在第

6、一章有关巨噬细胞功能和活化状态的研究中发现，合成鱼腥草素能够提高巨噬细胞产生的溶菌酶、酸性磷酸酶、补体c4以及IL．1p水平，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进巨噬细胞呼吸爆发，但对巨噬细胞表面C3b受体以及巨噬细胞产生的IL—lⅡ水平没有明显影响。溶菌酶、酸性磷酸酶、IL．1B水平上升以及呼吸爆发现象都是巨噬细胞活化标志。巨噬细胞的呼吸爆发可以由吞噬过程引起，但吞噬过程并不一定伴有呼吸爆发，例如由C3b受体介导的吞噬过程即不伴有呼吸爆发。根据已有报道，巨噬细胞的呼吸爆发需要细胞内钙离子信号参与。在第

7、二章的合成鱼腥草素在巨噬细胞内信号传导途径研究中发现，合成鱼腥草素能够提高巨噬细胞内游离钙离子浓度，促进蛋白激酶CaMKII以及细胞核活化转录因子CREB磷酸化，从而使它们进入活化状态。合成鱼腥草素还能够提高巨噬细胞内即早基因c．fos表达产物Fos蛋白水平。根据合成鱼腥草素在巨噬细胞内信号传导途径的研究结果，可以认为合成鱼腥草素首先提高巨噬细胞内游离钙离子浓度，钙离子浓度升高以后会引起CaMKII的自身磷酸化，磷酸化CaMKII进一步使转录因子CREB磷酸化，磷酸化CREB进入细胞核诱导c．f

8、os基因以及其它基因的表达，c．fos基因表达产物Fos是激活因子蛋白(A_P．1)的可变组分，可以进一步调节其它基因表达。在第三章的研究中发现，合成鱼腥草素能够促进脾细胞增殖，提高体外培养脾细胞分泌的IL．2水平，以及提高纯化外周血T淋巴细胞产生的Ⅲ．2水平。IgG和IgM的产生。另外还和免疫佐剂作用。合成鱼腥草素促进巨噬细胞活化，增强巨噬细胞功能，提高巨噬细胞产生的IL-1B及T淋巴细胞产生的IL．2水平等免疫调节作用可能是其免疫佐剂作用的药理学作用机理的一部分。关键词：合成鱼庭≤素；免疫面