肺部炎症模型中核因子κB的改变及蓝桉油和α蒎烯对其核转位活化的影响

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1、浙江大学硕士学位论文肺部炎症模型中核因子-κB的改变及蓝桉油和α-蒎烯对其核转位活化的影响姓名：周建娅申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：唐法娣2003.5.1浙江大学磺士学位论文臃部连塞模型妻堕篓量二堕塑夔窒墨蔓整整塑笠夔整墼茎鏊茎塞鋈堡墼篓塑潮f部炎症模型中核因子喵B的改变及蓝按油零lⅨ．蒎烯对其核转位活化的影响浙汪大学嚣学院骜瑾学2000级硕士硬究擞周建娅导师唐法娣攘要，?蘩害：孵暇系统疾病大郄分与受痰、炎痰发应密甥糖关，麴急攫嫂赫损伤，哮噗、f慢性阻塞性肺病(COPD)，其发瘸率和死亡率日趋升高。核因子一r,B(NF*心)作为～静警遮存在豹多功髓懿转录因予，是绷耱瘫多释猿

2、号转学途径戆汇聚纛，不仅参与介导了免疫应答、细胞应激、凋亡和增殖等多种相关基因的表达调控，而且在调节哮喘、旆损伤、COPD自露肺部疾病的有笑炎症反成基因中起关键作用。参与肺部炎痰性疾瘸的缨胞因子辩类极多，偿号网络极为复杂，如果我们能农一个较离豹承乎对产生炎性因子的总体环节进行调控，耐不是对上游信号通路孤藏地分而治之，将残秀寻我凝垄撬炎药蘩懿凝方蠹。赦我键熬NF。媾非兔获炎靶点，戳探囊JNF-r．B豹簇理性过度激活为豳标，寻找较特异的NF-r,B活性抑制剂，对肺部炎症性疾瘸中调控炎瘫反应辩关键环麓进行予鞭，将蠢广阔深远的应丽前景。双蘸桉砖纛撩瓣跨串提取豹箨发演蒜髂按砖演，其孛获蓝按盼孛

3、撵取豹又髂蒸桉油，桉叶油和蘸桉油主要含有1．8歆油綮、a．蒎烯等，目前研究发现桉叶油具有抗炎症盼俸耀，僵箕抗炎分予橇涮仍不鳙确，鎏子凇璀B在肺部免痰，炎症串的重要穗黧坚丕兰堡盎兰壁鲨塞整鳌壅塞楚型皇鳘篓差二壁篓夔塞墨蔓墼鎏塑笠夔整整茎孳董篓遂篷鳖整璧饿，故我们以NF枷作为抗炎症效应的靶橼来研究蔽桉油豹抗炎机制0夕～’网的：建立脂多糖(LPS)THP．1细胞致炎模型、小剂量LPS气管滴入及长期二氧化硫(s02)吸入诱发的太鬣慢往静帮炎症攘登，瓣椰瞒酌活铯状态，探讨蓝按浦及其主要成分氇．蒎烯对以上三模型中NF-r．B核转位潘化的影响。{／方法：采用人血单核细胞株THP．1、sD大鼠为实验

4、对象，建立脂多糖(LPS)THP．1、缁旎致炎模鳖、小翔萋LPS(200鹇)气餐滴入及长羯so。缀入诱发的大鬣後往赫部炎症模型，并各国以蓝桉油及洳蒎烯为绘药组。运用间接免疫荧光细胞化学法结念激光扫描共聚焦撼微镜(LSCM)测定THP-I细胞、大鼠支气管肺泡灌洗液中肺泡融璨缨照(pulmonaryalveolarmacrophages，FAMs){：￡异酸瓤酸荧必素(FITC)绿识荧光标记的NF-r．Bp65-亚单位(NF-r．B／p65)定位；运用低温和抑骚白酶条件下，低渗袈解缎稳貘挺欷施浆蛋鑫，继嚣嵩渗裘鳞核骥撼敬核虽鑫，Folin酚法定囊蛋鸯，弹以免疫印迹电泳法(Western-

5、blot)、双抗体夹心酶联免疫吸附囊验法(sandwichELISA)分析细胞核内NF-r,．B／p65水平、臌浆内IKB堪水平变化，并进行半定麓分析。统计学处理分辑聚用SPSSII．01绫诗软转包，统诗数据以罩姆表零，显萋艘检验爝翠因素方筵分析。蛾梁：1。免疫荧毙LSCM分辨爨拳：①聪常菝态粒髓译．1缩蕤，火鬣豫联s孛KF．r．B／p65荧光标记主要分布于胞浆区，核区很少，经LPs30rain刺激的n弹．1细胞、经小剂量LPS气管瀛入3、循盼大鼠p_AMs中NF．曲，p65荧光标记浓集予核区，胞浆区少见。②经蓝按浊或静获烯臻处壤豹TI-W．1缨照，荐班Lps30min触激，NF-r

6、．a／p65荧光标记则仍燕要位予胞浆区；经小剂誊LPS气管滴入，3w内蓝桉油给药的大藏P鲥涤孛硝t蜊5荧建标记瞧仍圭簧位子麓浆嚣。2-wes蛐-b101分折显示；①正常骶融1缎魏核蛋囊中有低零平熟}雌．嬗矗撼5表达，2强涯大学疆圭学链论文薅帮炎症模型串棱嚣子一绱鳃改变及戴技话释种蘸爝砖其棱转位疆纯瓣影嫡经LPS30mini{ilJ激的n{P．1细胞核内NF—KB／p65表达明显增简(P(O．05)；正常大瓯啼组织缁胞核鬣自中有低水平静NF—roB／p65表达，经小剂量LPS气管滴入及长期S02吸入豹大鼠肺组织缎胞核内NF—rd3／p65表达明显增高。③蓝桉油或Q．蒎烯(1、10、10

7、0岭·L～，30min)预处联可以抑f#JLPS30minj

8、{U激诱导的THP-1细胞核悫NF-r．B／p65鹣毫承平表达，且蘧爨夔按浊域静蒎爝热量豹增麴，NF-r,B／p65承乎桶对降低，经统计分析，呈良好的剂量依赖关系；其中蓝桉油10扯g·L-l和100黼·L4组、洳蒎浠100糙·L。缝，商统计学差弊(产<0．05)；经，l、翻量LPS气管漓入，3w内持续蓝桉油(30、100、300mg·kg。)给药的大鼠肺组织细胞核内NF—KB／p65表达比模艇组