连翘提取物对甲型流感病毒核蛋白表达影响的体外实验研究

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：斛莲签字日期：码年f月≯尸旧学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件

2、和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：缘纠4乞导师签名(手写)：勿嶝签字日期：砩年1月7o日签字日期山l；年y-月7日摘要背景：流感可

3、引起季节性流行和大流行，严重危害人民健康。目前抗流感病毒西药因毒副作用较大或耐药性的增加，限制了其应用。祖国传统中医药在预防与治疗流感的临床和基础理论方面的研究，受到国内外的广泛关注，寻找新的抗流感中药及探索其作用机制，有助于将中药推向世界和造福人类。目的：探讨连翘提取物(连翘苷、连翘醇提液、连翘水煎剂)对甲型流感病毒核蛋白基因体外干预的影响，为连翘抗流感病毒提供科学的理论依据。方法：1．实验分组：HeLa细胞组(HeLa细胞)、空质粒组(空质粒和HeLa细胞)、脂质体组(HeLa细胞和脂质体)、重组质

4、粒组(重组质粒基因转染HeLa细胞)、连翘苷组(连翘苷加入重组质粒组中)、连翘水煎剂组(连翘水煎剂加入重组质粒组中)、连翘醇提液组(连翘醇提液加入重组质粒组中)七组。2．细胞病变法确定连翘提取物最大无毒界限及实验用浓度。3．脂质体瞬时转染法转染HeLa细胞，并以其作为实验用靶细胞。4．胶体金免疫层析试纸法检测各实验组细胞培养上清和细胞内核蛋白的表达。5．提取胶体金检测阴性组及重组质粒组细胞总RNA，合成eDNA。6．荧光定量逆转录PCR检测重组质粒组及胶体金检测阴性组的核蛋白基因拷贝数，用统计学软件进行

5、分析。结果：1．重组质粒组细胞培养上清及细胞内胶体金法检测均为阳性；连翘醇提液组、连翘水煎剂组两组细胞培养上清为弱阳性，醇提液组更弱些；连翘苷组、连翘醇提液组、连翘水煎剂组三组细胞内为弱阳性，连翘苷组最弱，连翘醇提液组次之；细胞对照组、脂质体组、空质粒组和连翘苷组四组细胞培养上清及细胞对照组、脂质体组、空质粒组三组细胞内均为阴性。II摘要2．连翘苷组胞内核蛋白基因表达量为(2．07+0．2)×10。copies·gl～，重组质粒组胞内核蛋白基因表达量为(61．2+13)x10。copies·山～，连翘苷

6、组胞内核蛋白基因表达量低于重组质粒组胞内，差异有统计学意义(t=9．836，p<0．05)。结论：1．连翘苷可以下调瞬时转染HeLa细胞的甲型流感病毒核蛋白基因量，并能较强的抑制其核蛋白的表达。2．连翘水煎剂及连翘醇提液也能抑制瞬时转染HeLa细胞的甲型流感病毒核蛋白的表达，但均较连翘苷弱，连翘水煎剂最弱。关键词：连翘提取物；甲型流感病毒；核蛋白；瞬时转染IllAbstractABSTRACTBackground：Influenzaseasonalepidemicorpandemicinfluenzas

7、everelyimpairedhumanityhealth．Nowthemajorsideeffectsandincreasingdrugresistancelimittheantiviralwesternmedicinetobeused．MoreandmorepeoplepaidwidespreadattentiontotraditionalChinesemedicineonpreventionandtreatmentofinfluenzainclinicalandbasictheoryresearc

8、hindomesticandoverseas，tosearchfornewantiviralmedicineandexploreitsactionmechanism，willhelppushingtraditionalmedicinetotheworldandwillbebeneficialtomankind．objective：Tostudytheinterventioneffectsofforsythiaextracts(phillyr