细菌内毒素动态比浊法的应用研究

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1、中山大学硕士学位论文细菌内毒素动态比浊法的应用研究姓名：劳海燕申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：黄民20040528细菌内毒素动态比浊法的应用研究硕士研究生：劳海燕导师：黄民教授专业：药理学摘要细菌内毒素可以引起人体发热(热原反应)、休克甚至死亡，自从细菌内毒素检查法(BacterialEndotoxinTest以下简称BET)用于非经肠道用药的内毒素检测，以及GMP的推广，药品的内毒素已经得到良好的控制，美国药典(USPXXIV)中630多种非经肠道用药全部采用BET；尽管如此，热原反应的发生还是没有根除，1998年美国爆发了广泛的庆大霉素热原反应事件，经CDC与FD

2、A的联合调查，事件的原因如下，为了减弱庆大霉素的神经毒性，临床普遍的用药方法是在保持每日剂量不变得前提下，将原来的一日三次给药合并为每日一次，导致每次输入体内的内毒素超过闽值；USP因此收紧庆大霉素的内毒素限值，而庆大霉素的原料药均来自中国，该原料供应商也被调查和警告。这进一步提示，热原反应的控制不仅是药品生产者的责任，药品的使用环节也存在潜在的风险因素，在我国，中成药制剂和大部分抗生素仍采用家兔热原试验，小针剂甚至连家兔试验都不作，临床上多种药物又经常合并输注，医院内部配制的制剂、内部供应的介入性器材也缺乏完善的内毒素监控措旄，这些给用药安全带来更多的隐患，热原反应也时常见

3、诸报道；因此有必要建立完善合理的临床药学方法，对内毒素进行全面的控制，保障患者的安全治疗。本研究的目的是在医院临床药学的范畴建立内毒素的定量监控方法，对药品、制剂和医疗器械等的内毒素进行调查，为临床治疗提供安全保证。研究范围主要有三个方面，1．建立临床常用药物的内毒素定量检测，包括制药厂没有进行内毒素检查的药品和临床上常用的混合用药处方；2．血液透析过程的内毒素监控；3．院内制剂的内毒素控制，包括放射性显影剂的快速内毒素检测等的内毒素定量检测。本研究采用基于动态浊度测定的仪器分析方法，对细菌内毒素进行定量检测，实验方法按USPXXIV版的BET进行，同时参考《中国药典》200

4、0版和美国FDA颁布的鲎试验指南(1987)，研究方法主要包括以下三个步骤；1．确定内毒素限值(以下简称EL)，药品、制剂的内毒素限值参考美国、日本等国家药典或行业标准，我国特有的药品品种(如：中成药制剂)，按FDA鲎试验指南的方法计算内毒素限值；2．对每种药品、混合处方、制剂等均建立有效的定量内毒素检测方法，包括内毒素检查无干扰浓度(以下简称NIC)的筛选和进一步的验证，并设法排除干扰因素；3．对药品、混合处方、制剂等的内毒素负荷作初步的调查，找到潜在的风险因素，并对发现的问题提出解决方案和提供有效性测试。研究结果如下：1．本研究范围内的样本使用动态比浊法均获得有效的检测，

5、实验建立了12种抗生素，13种中成药制剂的动态比浊法检测；2．供试品对BET的干扰是试验过程中的主要障碍，药品的酸度、光谱吸收特征、对蛋白质的变性作用、以及其他理化性质等都会干扰BET，干扰的强度与药品的浓度正相关，通过酸度调整和稀释等方法可以有效的排除干扰；3．经过化学合成步骤制备的药品，如：半合成的头孢类抗生素等的内毒素含量通常很低，甚至低于检测的灵敏度，而中药的提取物中通常含有可检测到的内毒素，本研究中的药品都低于致热剂量；4．动态比浊法检测18FDG，可以在15分钟内作出定性判断，30分钟获得定量结果，解决了18FDG快速质控的要求；5．在对血液透析过程的内毒素研究的

6、初期，发现了较高的阳性率，在采取超滤等措施后，在研究期间，透析液内毒素没有发生阳性事件，透析过程的内毒素监控也逐步纳入日常检测范畴。研究结论：本研究建立了二十几种单个药物及几十种临床典型配方的细菌内毒素定量检测方法。所研究药品在《中国药典》中尚未要求作细菌内毒素检查或热原试验，本研究将为《中国药典》收载这些药品的BET在药学技术方法学上提供有价值的参考。本研究涉及的范围较广泛，将国际上先进的动态比浊法成功地应用于具体的临床药学质量控制环节，建立起行之有效的检测方法，在中成药制剂的内毒素定量检测方面，在建立检测方法的同时，也发现多数供试品含有低量内毒素，在联合用药的前提下，低剂

7、量内毒素也不容忽视，而在透析过程的控制中，找到了透析液内毒素污染的原因，在本研究过程中，透析过程的内毒素控制已经逐步纳入常规的质控范畴。通过本研究，已经初步在本院建立了内毒素的检测、监控方法，为临床治疗提供有力的技术支持和安全保障方法。IVApplicationoftheKineticTurbidimetricLimulusTestinClinicalPharmacyAbstractThebacterialendotoxininfusedinhumanbodyCancausefever，shockand