资源描述：
《膜分离法用于银黄复方有效部位分离的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、膜分离法用于银黄复方有效部位分离的研究作者：杨丽平,孔焕宇,朱嘉,蓝云才【摘要】目的探讨膜分离技术用于银黄复方有效部位提取的可能性。方法采用两级超滤和一级纳滤对银黄水煎液进行分离、浓缩,用HPLC法检测黄芩苷和绿原酸含量,蒽酮试剂比色法检测多糖含量。结果最终分离液多糖含量为3.41mg/mL,黄芩苷和绿原酸从原液的转移率分别为77.24%、79.02%。结论膜分离方法用于银黄水煎液有效部位的分离,保留了包括多糖在内的多种活性成分,方法简单。【关键词】膜分离；银黄水煎液；黄芩苷；绿原酸；多糖Keywords：membraneseparation；Yinhuangdecoction；baicali
2、n；caffeotannicacid；polycose6银黄方由金银花和黄芩组成,有清热解毒、抗菌抗炎、保肝利胆的功能,有效部位含有黄酮类化合物、绿原酸和多糖等成分。有关多糖的活性已引起广泛关注,如黄芩多糖在细胞水平的抗病毒作用,金银花多糖的双歧因子作用。但是《中华人民共和国药典》收载的银黄口服液是以黄芩苷与金银花提取物勾兑而成,金银花提取物是醇沉后的上清液,46%的多糖被醇沉弃掉[1]。本研究依据分子量分段分离的原理,采用组合膜分离系统分离银黄水煎液,以黄芩苷和绿原酸为指标成分考察分离效率。 1仪器与试药三达膜科技有限公司生产的超滤膜分离设备(UF-02型),超滤一级膜(截留分子量50万)
3、,超滤二级膜(截留分子量3万),纳滤膜分离设备(1812型),纳滤膜(截留分子量300)；高效液相色谱仪：Waters510型输液泵、U6k进样器、Beckman163型可变波长紫外检测器和杭州普惠Sepu3000工作站。金银花和黄芩产自山东；黄芩苷对照品(批号715-200010)、绿原酸对照品(批号110753-200212)由中国药品生物制品检定所提供。水为高纯水,甲醇、乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1原液制备称取金银花180g,黄芩60g,按10、6、6、6倍加水量提取回流4次,每次1h,滤过,合并滤液作为原液。 2.2膜分离过程6超滤透析：原液经一级膜超
4、滤,透析液再经二级膜超滤。纳滤截留：二级超滤透析液经纳滤膜截留得到有效部位浓缩液。 2.3膜分离条件超滤：温度20～40℃,药液浓缩到3倍时加入进料液1倍量的水,压力0.45MPa[2]。纳滤：温度35℃,压力2MPa。 2.4HPLC法测定黄芩苷、绿原酸含量[2] (见表1)表1膜分离液黄芩苷与绿原酸含量测定结果(略) 2.5蒽酮试剂比色法测定多糖含量[3] 2.5.1多糖测定 多糖含量(mg/mL)＝CDf/V×100%。其中：C为供试液中葡萄糖浓度(mg/mL)；D为稀释因素；f为银黄多糖的换算因素；V为样品溶液的体积,结果见表2。表2纳滤截留液多糖含量测定结果(略) 2.
5、5.2加样回收率测定精密吸取同一批纳滤截留液5份,每份加入定量的精制银黄多糖,按多糖含量测定同法提取、测定,计算回收率,结果见表3。表3多糖加样回收率测定结果(略)6 3讨论 3.1分离效率银黄水煎液经过三级膜分离后黄芩苷和绿原酸的总转移率分别是77.24%和79.02%,而去掉第三级膜的两级膜总转移率是84.12%和91.30%[4],说明增加1个膜进一步除杂时,也会损失部分有效成分,包括膜吸附、管道存留等。三级膜有效成分的分步转移率均在85%以上,体现了较高的膜分离效率。 3.2膜的选择中药有效部位各种成分的分子量一般不超过1000,但活性多糖的分子量较大且分布范围很广。为了去除大分
6、子杂质同时最大限度地透过有效成分和活性多糖,膜孔径筛选以主要成分黄芩苷和绿原酸的转移率为指标,筛选结果是用50万膜初步截留细菌、悬浮颗粒等杂质,透析液再经3万膜处理,大于3万的蛋白质、果胶、鞣质等杂质被截留。由于有生理活性的多糖具备的特性是水溶性D-葡聚糖和具线状结构或尽可能短的分枝,所以活性多糖较容易通过3万膜,而结构复杂、分子量大的非活性多糖被截留。银黄方有效成分的分子量都大于300,所以截留分子量300的纳滤膜能截留浓缩几乎全部有效成分,但要注意洗出机器和膜上的残留,因为在高度浓缩状态下,残留量较大。6 3.3多糖的分离 有效物质的醇溶性和多糖的醇不溶性使传统的醇沉方法将大部分活性多
7、糖醇沉去掉,或在高温浓缩时破坏了多糖,对于醇溶有效物质的保留率醇沉法也低于超滤法[1]。膜分离方法不用有机溶剂,选择不同的膜对复方合煎液进行分子量分段分离,在高效提取其它活性成分时能够提到活性多糖,可保留中药原有的复方特色,方法简单且低温操作,能为复方中药有效组分完整的分离提取提供一个可行的方法。【参考文献】]李淑莉,宋志前.超滤膜截留分子量对金银花单味药超滤效果的影响及与醇沉法的比较[J].中药
