浅谈中草药有效成份分离法

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1、浅谈中草药有效成份分离法550025贵州大学生命科学学院贵州贵阳凌正龙[摘要]分离科学是一门跨学科的新兴边缘科学，分离技术作为生物工程技术中的下游关键技术，由于其丰富多样且高效先进，在当今国际生物与化学类科研生产中已有较广泛的应用，并因此成为现代中医药研发领域的共性关键技术。本文从中药分离工艺设计原理等方面，较系统地讨论了中药分离技术的方法。[关键词]中草药有效成分分离法一、结晶法雷氏盐沉淀法(分离水溶性生物碱)、胆甾醇沉淀法需要掌握结晶溶剂选择的一般原则及判定结晶(分离甾体皂苷)等。纯度的方法。结晶溶剂选择的一般原则

2、：对欲分离的成分热三、萃取法时溶解度大，冷时溶解度小；对杂质冷热都不溶或冷萃取法包括以下几种：热都易溶。沸点要适当，不宜过高或过低，如乙醚就(一)液一液萃取不宜用。判定结晶纯度的方法：理化性质均一；固体选择两种相互不能任意混溶的溶剂，通常一种化合物熔距≤2℃；TLC或PC展开呈单一斑点；为水，另一种为石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁HPLC或GC分析呈单峰。醇等。将待分离混合物混悬于水中，置分液漏斗中，加适当极性的有机溶剂，振摇后放置，分取有机相或二、沉淀法水相，即可将极性不同的成分分离。分离的难易取决可通过4条途径

3、实现：于两种物质在同一溶剂系统中分配系数的比值，即(一)通过改变溶剂极性改变成分的溶解度。分离因子。分离因子愈大，愈好分离。常见的有水提醇沉法(沉淀多糖、蛋白质)、醇提(二)纸色谱(PC)，属于分配色谱水沉法(沉淀树脂、叶绿素)、醇提乙醚或丙酮沉淀法可用于糖的检识、鉴定，亦可用于生物碱的色谱(沉淀皂苷)等。鉴别等。(二)通过改变溶剂强度改变成分的溶解度。(三)分配柱色谱使用较多的是盐析法，即在中药水提液中加入可分为正相色谱与反相色谱。正相色谱固定相一定量的无机盐，使某些水溶性成分溶解度降低而极性大，流动相极性小，可用于

4、分离水溶性或极性较沉淀出来。大的成分。反相色谱与此相反，适宜分离脂溶性化合(三)通过改变溶剂PH值改变成分的存在状物。态。另外，根据分子量大小，还可以利用以下方法：适用于酸性、碱性或两性亲脂性成分的分离。如1．透析法分离碱性成分的酸提碱沉法和分离酸性成分的碱提此方法适用于水溶性的大分子成分(如蛋白质、多酸沉法。肽、多糖)与小分子成分(如氨基酸、单糖、无机盐)的(四)通过加入某种试剂与欲分离成分生成难溶分离。性的复合物或化合物。2．凝胶过滤法如铅盐沉淀法(包括中性醋酸铅或碱式醋酸铅)、又称凝胶渗透色谱、分子筛过滤、排阻色

5、谱。分2010．03r健康必读73离混合物时，各组分按分子由大到小的顺序先后流度。同时，溶剂也会影响聚酰胺对被分离物质的吸出并得到分离。常用凝胶有葡聚糖凝胶附，表现出各种溶剂在聚酰胺吸附色谱中洗脱能力(SePhadexG1和羟丙基葡聚糖凝胶(SePhadex有大有小，其由弱到强的大致顺序为水、甲醇、丙酮、LH一2O)。前者只适于在水中应用。后者既可在水中氢氧化钠水溶液等。应用，又可在有机溶剂中应用，分离混合物时，既有(五)大孔吸附树脂吸附色谱分子筛作用，又有吸附作用。如分离游离黄酮时，主大孔吸附树脂同时具有吸附性和分子

6、筛性。一要靠吸附作用；分离黄酮苷时，则分子筛的性质起主般非极性化合物在水中易被非极性树脂吸附，极性导作用。物质在水中易被极性树脂吸附。物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就小，反之就大。对三、吸附法非极性大孔吸附树脂来说，洗脱溶剂极性越小，洗脱(一)硅胶吸附色谱能力越强。该法可用于皂苷类成分的纯化分离。硅胶为极性吸附剂，吸附力的大小取决于被分(六)还有离子交换法离物质的极性f极性越大，吸附力越强)和洗脱溶剂的适用于酸性、碱性或两性成分的分离，即要求极性(溶剂极性越弱，硅胶对被分离物质的吸附能力被分离物质在水(或

7、酸水，或碱水)溶液中呈解离状越强1。因此，用硅胶吸附色谱分离一组极性不同的态。根据被分离物质呈解离状态时所带电荷的性混合物时，极性大的物质因吸附力大而洗脱慢；洗脱质，可选择阴离子交换树脂或阳离子交换树脂。鉴溶剂的极性增大，洗脱能力增强，洗脱速度加快。另于中药所含大多数酸性、碱性或两性成分的酸碱外硅胶有一定的酸性，在用其分离碱性成分时，需注性均较弱，一般在分离碱性成分时选择强酸性的意。阳离子交换树脂，在分离酸性成分时选择强碱性(二)氧化铝吸附色谱的阴离子交换树脂。通过选择阴离子交换树脂和氧化铝亦为极性吸附剂，其吸附规律与

8、硅胶相阳离子交换树脂，可将中药水提物中酸性、碱性、似。不同的是，氧化铝有一定的碱性，且具有铝离子，两性和中性成分进行分离。离子交换法亦可用于在用其分离一些酸性或酚性成分时，易产生不可逆相同电荷离子的分离，其分离的依据是解离程度吸附而不能被溶剂洗脱。如蒽醌类、黄酮类(葛根异的不同(酸性或碱性不同的化合物，在相同条件黄酮除外)成分分离